一 中文摘要 | 第1-6页 |
二 ABSTRACT | 第6-8页 |
三 英文缩略词表 | 第8-9页 |
四 引言 | 第9-11页 |
五 材料与方法 | 第11-22页 |
1. 材料 | 第11-14页 |
·细胞株与主要试剂 | 第11-14页 |
·主要仪器和设备 | 第14页 |
2. 实验方法 | 第14-21页 |
·TE-1 及Eca109 细胞培养 | 第14-15页 |
·细胞生长条件 | 第14-15页 |
·细胞传代 | 第15页 |
·siRNA 转染 | 第15-17页 |
·实验分组 | 第15-16页 |
·si RNA 准备 | 第16页 |
·si RNA 转染步骤 | 第16-17页 |
·CCK8 法检测细胞增殖 | 第17页 |
·RT-PCR 检测COX-2、5-LOX、Bcl-2、Caspase-9 及Bax mRNA 表达 | 第17-19页 |
·总RNA 的抽提 | 第17页 |
·逆转录反应 | 第17-18页 |
·PCR 反应 | 第18-19页 |
·转录PCR 产物的检测 | 第19页 |
·Western Blotting 检测COX-2、5-LOX、Bcl-2、Caspase-9 及Bax 蛋白表达 | 第19-20页 |
·蛋白质的抽提 | 第19-20页 |
·蛋白浓度测定 | 第20页 |
·Western Blotting 分析 | 第20页 |
·ELISA 检测PGE2 及LT84 含量 | 第20-21页 |
·流式细胞仪检测细胞周期 | 第21页 |
3. 数据处理 | 第21-22页 |
六 结果 | 第22-39页 |
1. 高抑制效率COX-2 siRNA 序列的筛选 | 第22-24页 |
2. 转染COX-2 siRNA 后TE-1 及Eca109 细胞增殖情况 | 第24-25页 |
3.C OX-2 siRNA 转染后对TE-1 及Eca109 细胞COX-2 及5-LOX 表达的影响 | 第25-26页 |
·COX-2 siRNA 转染后COX-2 mRNA 及蛋白表达情况 | 第25-26页 |
·COX-2 siRNA 沉默后5-LOX mRNA 表达情况 | 第26页 |
4.C OX-2 及5-LOX 下游产物PGE2 和LT84 含量变化 | 第26-29页 |
5.流式细胞仪检测细胞周期变化 | 第29-33页 |
6.Bcl-2、Caspase-9 及Bax mRNA 及蛋白表达水平变化 | 第33-39页 |
七 讨论 | 第39-43页 |
1. 以RNA 干扰技术实现ESCC 细胞的COX-2 基因沉默 | 第39-40页 |
2.C OX-2 siRNA 干预后的ESCC 细胞5-LOX 表达 | 第40-41页 |
3.C OX-2 siRNA 抑制后ESCC 细胞的细胞周期改变 | 第41页 |
4.C OX-2 siRNA 处理后ESCC 细胞增殖凋亡主要相关基因的表达 | 第41-42页 |
5.C OX-2 基因抑制与AA 代谢分流调节 | 第42-43页 |
八 全文结论 | 第43-47页 |
九 致谢 | 第47-48页 |
十 综述 | 第48-56页 |
参考文献 | 第53-56页 |
十一、附录 | 第56页 |
1. 硕士研究生学习期间发表的论著 | 第56页 |
2. 硕士研究生学习期间参与专著编写情况 | 第56页 |
3. 硕士研究生学习期间论文获奖情况 | 第56页 |
4. 硕士研究生学习期间获得荣誉 | 第56页 |