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鼠李糖基转移酶原核基因工程菌的构建与表达条件优化

摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
第1章 绪论第10-25页
    1.1 引言第10-11页
    1.2 橙皮苷简介第11-17页
        1.2.1 橙皮苷的理化性质第11-12页
        1.2.2 橙皮苷的应用第12-14页
        1.2.3 橙皮苷的改性研究进展第14-17页
    1.3 新橙皮苷简介第17-20页
        1.3.1 新橙皮苷的来源第17-19页
        1.3.2 新橙皮苷的应用第19-20页
    1.4 糖基转移酶研究进展第20-22页
        1.4.1 植物次生合成代谢中糖基化的作用第21页
        1.4.2 糖基转移酶基因的研究进展第21-22页
    1.5 本文的研究意义和内容第22-25页
        1.5.1 研究的意义第22-23页
        1.5.2 研究的内容第23-25页
第2章 鼠李糖基转移酶原核基因工程菌的构建与表达第25-45页
    2.1 引言第25-27页
    2.2 实验材料第27-31页
        2.2.1 菌株与质粒第27页
        2.2.2 主要试剂与酶第27-28页
        2.2.3 主要仪器第28页
        2.2.4 培养基第28-29页
        2.2.5 主要溶液配制第29-30页
        2.2.6 引物第30-31页
    2.3 实验方法第31-38页
        2.3.1 菌株活化第31页
        2.3.2 DH5α和BL21感受态细胞制备第31-32页
        2.3.3 GT2基因的扩增第32-33页
        2.3.4 p UCm-T-GT2克隆载体的构建第33-34页
        2.3.5 重组质粒(p UCm-T-GT2)转化至DH5α第34页
        2.3.6 重组质粒(p UCm-T-GT2)的检测第34-35页
        2.3.7 重组表达载体(p ET-Dsb A-GT2)的构建第35-37页
        2.3.8 重组BL21(p ET- Dsb A-GT2) 菌株的构建第37页
        2.3.9 BL21(p ET- Dsb A-GT2)重组菌株的诱导表达第37页
        2.3.10 SDS-PAGE电泳检测诱导表达第37-38页
    2.4 结果与讨论第38-43页
        2.4.1 GT2基因的扩增第38-39页
        2.4.2 GT2基因的测序结果第39-40页
        2.4.3 p UCm-T-GT2克隆载体的验证第40页
        2.4.4 p ET-Dsb A质粒提取结果第40-41页
        2.4.5 重组表达载体p ET-Dsb A-GT2验证第41-42页
        2.4.6 重组菌株BL21诱导表达结果第42-43页
    2.5 本章小结第43-45页
第3章 鼠李糖基转移酶的体外复性、纯化及其性质的研究第45-63页
    3.1 引言第45-46页
    3.2 实验材料第46-49页
        3.2.1 菌株第46页
        3.2.2 主要试剂第46-47页
        3.2.3 主要仪器第47-48页
        3.2.4 培养基第48-49页
    3.3 实验方法第49-55页
        3.3.1 菌株活化第49页
        3.3.2 鼠李糖基转移酶的分离与纯化第49-51页
        3.3.3 鼠李糖基转移酶酶活测定第51-54页
        3.3.4 鼠李糖基转移酶酶学性质的研究第54-55页
    3.4 结果与讨论第55-61页
        3.4.1 鼠李糖基转移酶纯化结果第55-56页
        3.4.2 鼠李糖基转移酶酶活检测结果第56-57页
        3.4.3 鼠李糖基转移酶酶学性质的研究结果第57-61页
    3.5 本章小结第61-63页
第4章 重组工程菌BL21(p ET- Dsb A-GT2) 诱导表达条件的优化第63-74页
    4.1 引言第63页
    4.2 实验材料第63-64页
        4.2.1 菌株第63页
        4.2.2 主要试剂第63-64页
        4.2.3 主要仪器第64页
        4.2.4 培养基第64页
        4.2.5 主要溶液配制第64页
    4.3 实验方法第64-68页
        4.3.1 菌株活化第64-65页
        4.3.2 目的蛋白表达形式的分析方法第65-66页
        4.3.3 培养条件的优化第66-68页
    4.4 结果与讨论第68-72页
        4.4.1 诱导时机的优化第68-69页
        4.4.2 诱导时间的优化第69页
        4.4.3 诱导温度的优化第69-70页
        4.4.4 诱导剂IPTG浓度的优化第70-71页
        4.4.5 摇床转速的优化第71-72页
    4.5 本章小结第72-74页
第5章 结论与展望第74-76页
    5.1 总结第74-75页
    5.2 展望第75-76页
致谢第76-77页
参考文献第77-85页
附录第85-86页
攻读学位期间的研究成果第86页

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