| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 实验研究 | 第12-53页 |
| 第一章 NRP-1过表达转基因绒山羊模型的建立 | 第12-28页 |
| 1. 材料 | 第13-14页 |
| 1.1 实验仪器及设备 | 第13页 |
| 1.2 实验材料 | 第13页 |
| 1.3 主要试剂及耗材 | 第13-14页 |
| 2. 方法 | 第14-22页 |
| 2.1 次级毛乳头细胞总RNA的提取 | 第14-15页 |
| 2.2 NRP-1过表达载体的构建 | 第15-18页 |
| 2.2.1 NRP-1过表达载体相关基因的克隆 | 第15-17页 |
| 2.2.2 目的片段的酶切反应 | 第17页 |
| 2.2.3 线性片段与骨架载体的链接 | 第17-18页 |
| 2.3 NRP-1过表达阳性单克隆细胞的筛选 | 第18-21页 |
| 2.3.1 原代细胞的分离及培养 | 第18-19页 |
| 2.3.2 NRP-1过表达质粒的扩大培养 | 第19页 |
| 2.3.3 NRP-1过表达细胞电转染 | 第19页 |
| 2.3.4 NRP-1过表达单克隆细胞的获得 | 第19-20页 |
| 2.3.5 NRP-1过表达单克隆细胞基因组的提取 | 第20页 |
| 2.3.6 NRP-1过表达阳性单克隆细胞系的鉴定 | 第20-21页 |
| 2.4 NRP-1过表达阳性单克隆细胞系的核移植 | 第21-22页 |
| 2.4.1 卵细胞的成熟 | 第21页 |
| 2.4.2 供体细胞的准备 | 第21页 |
| 2.4.3 核移植 | 第21页 |
| 2.4.4 电融合 | 第21-22页 |
| 2.4.5 重构胚的激活 | 第22页 |
| 2.4.6 克隆胚胎的体外培养 | 第22页 |
| 2.4.7 克隆胚胎移植 | 第22页 |
| 3. 结果 | 第22-25页 |
| 3.1 NRP-1过表达载体的构建 | 第22-24页 |
| 3.2 过表达NRP-1单克隆细胞系的建立 | 第24页 |
| 3.3 过表达NRP-1转基因山羊模型的生产 | 第24-25页 |
| 4. 讨论 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-28页 |
| 第二章 NRP-1相关次级毛囊信号通路的研究 | 第28-53页 |
| 1. 材料 | 第29-30页 |
| 1.1 实验仪器设备 | 第29-30页 |
| 1.2 实验材料 | 第30页 |
| 1.3 主要试剂和耗材 | 第30页 |
| 2. 方法 | 第30-42页 |
| 2.1 免疫共沉淀联合质谱法测定与MRP-1相互作用的蛋白质 | 第30-35页 |
| 2.1.1 阿尔巴斯白绒山羊次级毛乳头细胞总蛋白的提取 | 第30-31页 |
| 2.1.2 免疫沉淀相互作用蛋白 | 第31-32页 |
| 2.1.3 SDS-PAGE分离胶和浓缩胶的配制 | 第32-33页 |
| 2.1.4 考马斯亮蓝染色 | 第33-34页 |
| 2.1.5 质谱鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2 哺乳动物双杂交系统验证与NRP-1相互作用的蛋白 | 第35-39页 |
| 2.2.1 基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.2 目的片段及载体的酶切反应 | 第36页 |
| 2.2.3 线性片段与骨架的连接 | 第36-37页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第37页 |
| 2.2.5 转染细胞 | 第37-38页 |
| 2.2.6 检测荧光素酶相对活性 | 第38-39页 |
| 2.3 检测NRP-1与Prdx2表达量存在的关系 | 第39-42页 |
| 2.3.1 NRP-1过表达与干扰载体的构建 | 第39页 |
| 2.3.2 转染细胞 | 第39-40页 |
| 2.3.3 实时定量PCR实验 | 第40-41页 |
| 2.3.4 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第41-42页 |
| 3. 结果 | 第42-48页 |
| 3.1 免疫共沉淀联合质谱法测定与NRP-1相互作用的蛋白质 | 第42-44页 |
| 3.2 相关基因分析及载体的构建 | 第44-46页 |
| 3.3 哺乳动物双杂交系统双荧光素酶数据分析 | 第46-47页 |
| 3.4 NRP-1与Prdx2之间的相互关系 | 第47-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第二部分 文献综述 Neuropilin-1研究进展 | 第53-61页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
