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苹果MdCSNs家族的生物信息学和表达分析及MdCSN7-1基因的遗传转化研究

符号说明第1-10页
中文摘要第10-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-30页
   ·COP9信号复合体第13-20页
     ·COP9信号复合体的由来第13-14页
     ·CSN结构第14-15页
       ·与CSN通用分子结构的另外两个复合体:蛋白酶盖子和e IF3复合体第15页
     ·CSN功能第15-20页
       ·CSN通过泛素/26S蛋白酶系统发挥功能第15-17页
       ·CSN调控CRLs第17-19页
       ·CSN和CAND1调控CRL循环第19-20页
     ·CSN完整复合体和亚复合体第20页
   ·CSN在植物发育中的作用第20-26页
     ·CSN在光形态建成和其他光诱导过程第20-21页
     ·CSN在花发育中第21页
     ·CSN在激素信号转导途径中第21-23页
       ·生长素信号第22页
       ·茉莉酸信号第22页
       ·赤霉素信号第22-23页
     ·CSN在植物病原体中的响应第23-24页
       ·R调节的抗性第23页
       ·JA介导的防卫第23-24页
       ·水杨酸介导的防卫第24页
       ·劫持CSN作为成功防卫细菌治病性一种策略第24页
     ·在植物和其他生物中CSN和其他细胞过程第24-26页
       ·细胞循环第25页
       ·DNA修复第25-26页
       ·基因表达第26页
   ·CSN7第26-27页
     ·CSN7与各亚基间的互作关系第27页
   ·生物信息学第27-28页
   ·本研究的目的和意义第28-30页
2 材料与方法第30-43页
   ·材料第30-32页
     ·植物材料第30页
     ·菌株与载体第30页
     ·酶、抗生素、各种化学药品及生化试剂第30-31页
     ·主要仪器及设备第31页
     ·PCR引物第31页
     ·培养基第31页
     ·抗生素第31-32页
     ·溶液和缓冲液第32页
   ·实验方法第32-41页
     ·模板DNA的制备第32页
     ·RNA的提取第32页
     ·RNA含量与纯度检测第32页
     ·RNA的纯化(除DNA)第32-33页
     ·c DNA链的合成第33-34页
     ·目的基因片段的扩增第34页
     ·PCR扩增产物的回收第34页
     ·PCR回收产物连接到载体:第34页
     ·连接产物的转化:第34-35页
     ·质粒DNA的提取第35页
     ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备与转化第35-36页
     ·质粒DNA的酶切第36页
     ·CSN7基因表达载体的构建第36-37页
       ·CSN7基因正义表达载体的构建第36-37页
       ·CSN7基因反义表达载体的构建第37页
     ·实时定量RT-PCR第37-38页
       ·引物设计合成第37-38页
       ·反转录具体方法见 2.1.7.4第38页
       ·q RT-PCR扩增第38页
     ·植物总蛋白的提取第38-39页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第39-40页
     ·转膜第40页
     ·Western Blot第40-41页
   ·生物信息学分析第41-43页
     ·苹果Md CSNs基因家族成员的确定第41页
     ·蛋白质结构分析第41-42页
       ·一级结构理化性质分析第41页
       ·苹果Md CSNs家族蛋白二级结构分析第41页
       ·苹果Md CSNs保守域结构分析第41-42页
       ·苹果Md CSNs家族蛋白三级结构分析第42页
     ·构建苹果Md CSNs系统发育树第42页
     ·Md CSNs基因结构及染色体定位分析第42页
     ·亚细胞定位预测第42-43页
3 结果与分析第43-59页
   ·苹果Md CSNs家族生物信息学分析第43-54页
     ·苹果Md CSNs家族基因的确定第43-44页
     ·苹果Md CSNs家族基因进化分析第44页
     ·苹果Md CSNs家族基因的基本特征及理化性质分析第44-45页
     ·苹果Md CSNs家族蛋白二级结构分析第45-47页
     ·苹果Md CSNs蛋白结构域分析第47-51页
     ·苹果Md CSNs家族蛋白三级结构预测第51页
     ·苹果Md CSNs家族染色体定位分析第51页
     ·苹果Md CSNs基因结构分析第51-53页
     ·亚细胞定位预测第53-54页
   ·苹果Md CSNs基因时空表达分析第54-56页
   ·苹果Md CSN7-1 转基因材料的获得第56-59页
     ·苹果Md CSN7-1 基因的克隆及序列分析第56页
     ·苹果Md CSN7-1 基因遗传转化苹果愈伤第56-59页
       ·Md CSN7-1 转基因表达载体的构建第56-57页
       ·苹果转基因愈伤的获得第57页
       ·Md CSN7-1 转基因表达王林愈伤组织的定量检测第57页
       ·Md CSN7-1 转基因表达王林愈伤组织的Western检测第57-59页
4 讨论第59-61页
   ·苹果Md CSNs家族基因生物信息学方面第59-60页
   ·苹果Md CSN7-1 转基因愈伤方面第60-61页
5 结论第61-62页
6 参考文献第62-70页
7 附录第70-76页
致谢第76页

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