| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-21页 |
| ·乙醇脱氢酶的研究 | 第8-12页 |
| ·微生物乙醇脱氢酶的研究 | 第8页 |
| ·植物中乙醇脱氢酶的研究 | 第8-11页 |
| ·动物和人中乙醇脱氢酶的研究 | 第11-12页 |
| ·乙醇脱氢酶结构和反应机制 | 第12-13页 |
| ·乙醇脱氢酶的功能和作用 | 第13-15页 |
| ·ADH动力学特征 | 第15-16页 |
| ·动力学参数 | 第15页 |
| ·底物及其抑制剂 | 第15页 |
| ·乙醇的药物动力学模型 | 第15-16页 |
| ·ADH的应用 | 第16-17页 |
| ·乙醇生物传感器中的ADH | 第16页 |
| ·用于化工生产的ADH | 第16页 |
| ·ADH用于解酒 | 第16-17页 |
| ·蛋白质功能研究方法及技术 | 第17-19页 |
| ·蛋白质组学 | 第17页 |
| ·蛋白质相互作用 | 第17-18页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第18-19页 |
| ·蛋白质三维结构分析 | 第19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 拟南芥ADH原核表达纯化 | 第21-40页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·试剂与仪器设备 | 第21-22页 |
| ·各种培养基以及相关试剂配制 | 第22-23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-33页 |
| ·拟南芥叶片RNA的提取 | 第23-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第25-29页 |
| ·SDS-聚丙烯酞胺凝胶制作及电泳过程 | 第29-30页 |
| ·AtADH基因的序列分析 | 第30页 |
| ·AtADH蛋白的原核表达与纯化及TEV纯化 | 第30-32页 |
| ·TEV酶纯化 | 第32-33页 |
| ·Western blot鉴定AtADH蛋白 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·AtADH基因序列的生物信息学分析 | 第33-36页 |
| ·AtADH的原核表达与纯化 | 第36-37页 |
| ·western检测AtADH蛋白 | 第37-38页 |
| ·AtADH蛋白晶体生长 | 第38-39页 |
| ·蛋白晶体生长条件初筛 | 第38-39页 |
| ·AtADH蛋白晶体生长条件的优化 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 拟南芥乙醇脱氢酶的酶学性质 | 第40-45页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第40页 |
| ·各种培养基以及相关试剂配制 | 第40页 |
| ·方法及原理 | 第40-42页 |
| ·pH值对乙醇脱氢酶活力的影响 | 第40-41页 |
| ·拟南芥乙醇脱氢酶广泛的底物选择性 | 第41页 |
| ·拟南芥乙醇脱氢酶酶促反应动力学常数的测定 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-43页 |
| ·拟南芥乙醇脱氢酶最适pH | 第42页 |
| ·乙醇脱氢酶最适底物 | 第42-43页 |
| ·拟南芥乙醇脱氢酶动力学分析 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 野生型与突变体ADH酶活力比较 | 第45-53页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·试剂与仪器设备 | 第45页 |
| ·各种培养基以及相关试剂配制 | 第45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·突变体载体的构建及蛋白纯化 | 第46页 |
| ·Gromacs程序计算方法及蛋白质分子动力学（molecular dynamics，MD） | 第46-47页 |
| ·蛋白浓度标准曲线制作 | 第47-48页 |
| ·乙醇脱氢酶突变体酶促反应动力学常数的测定 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-52页 |
| ·人、马、拟南芥乙醇脱氢酶蛋白质序列比对以及动力学参数比较 | 第48-49页 |
| ·AtADH（S176G、F322G）突变体角度变化结果 | 第49-50页 |
| ·乙醇脱氢酶突变体的纯化 | 第50-51页 |
| ·野生型及突变体蛋白浓度定量实验 | 第51页 |
| ·突变体与野生型ADH酶活力参数比较 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 结论和展望 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
