| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 英文缩写说明 | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-22页 |
| ·克唑替尼的研究进展 | 第9-14页 |
| ·非小细胞肺癌 | 第9页 |
| ·克唑替尼 | 第9-10页 |
| ·克唑替尼的临床研究 | 第10页 |
| ·克唑替尼的作用机制 | 第10-13页 |
| ·克唑替尼的合成路线 | 第13-14页 |
| ·手性醇的合成 | 第14-15页 |
| ·化学法合成手性醇 | 第14页 |
| ·生物法合成手性醇 | 第14-15页 |
| ·还原反应中辅酶的循环再生 | 第15-19页 |
| ·光化学法 | 第16页 |
| ·电化学法再生 | 第16页 |
| ·化学法再生 | 第16-17页 |
| ·酶法再生 | 第17-19页 |
| ·(S)1(2,6-二氯3氟苯基)乙醇的制备方法 | 第19-20页 |
| ·立题依据 | 第20-21页 |
| ·主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 葡萄糖脱氢酶与乙醇脱氢酶重组表达菌株的构建 | 第22-38页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验试剂 | 第23页 |
| ·质粒、菌株与培养 | 第23页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·大肠杆菌的培养与保藏 | 第24页 |
| ·CaCl2法制备E.coli DH5α 和E.coli BL21(DE3)感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·转化大肠杆菌质粒 | 第25页 |
| ·碱裂解法抽提大肠杆菌质粒 | 第25页 |
| ·PCR方法 | 第25-26页 |
| ·目的DNA片段的胶回收 | 第26页 |
| ·核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·DNA的酶切 | 第27页 |
| ·DNA片段的连接 | 第27页 |
| ·葡萄糖脱氢酶重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·乙醇脱氢酶重组质粒的构建 | 第28页 |
| ·重组酶蛋白的试表达 | 第28页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第28-29页 |
| ·葡萄糖脱氢酶和乙醇脱氢酶酶活的测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳的检测 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·葡萄糖脱氢酶表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·乙醇脱氢酶表达质粒的构建 | 第32页 |
| ·重组酶蛋白E.coli BL21-GDH表达条件的优化 | 第32-34页 |
| ·重组酶蛋白E.coli BL21-ADH表达条件的优化 | 第34-36页 |
| ·E.coli BL21-GDH与E.coli BL21-ADH蛋白质含量的测定 | 第36页 |
| ·GDH与ADH酶活的测定 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 第3章 葡萄糖脱氢酶与乙醇脱氢酶共表达的研究 | 第38-45页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·菌株、质粒与培养基 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·共表达重组菌株的构建 | 第39页 |
| ·E. coli BL21-ADH/GDH共表达条件的优化 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-44页 |
| ·双质粒共表达菌株E.coli BL21-ADH/GDH的构建 | 第40-41页 |
| ·共表达重组菌E.coli BL21-ADH/GDH表达条件的优化 | 第41-43页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 乙醇脱氢酶与葡萄糖脱氢酶偶联催化制备(S)1(2,6-二氯3氟苯基)乙醇 | 第45-60页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第45-46页 |
| ·实验试剂 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-52页 |
| ·双酶偶联催化制备(S)1(2,6-二氯3氟苯基)乙醇 | 第46页 |
| ·双酶共表达催化制备(S)1(2,6-二氯3氟苯基)乙醇 | 第46-47页 |
| ·反应条件对制备(S)1(2,6-二氯3氟苯基)乙醇的影响 | 第47-48页 |
| ·转化产物的小量分离 | 第48-49页 |
| ·转化产物的分析 | 第49页 |
| ·转化产物含量的测定 | 第49-50页 |
| ·共表达重组菌E.coli BL21-ADH/GDH的罐发酵培养 | 第50-51页 |
| ·共表达重组菌体系的放大转化 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-59页 |
| ·底物投料量对转化率的影响 | 第52页 |
| ·pH对转化率的影响 | 第52-53页 |
| ·温度对转化率的影响 | 第53-54页 |
| ·葡萄糖添加量对转化率的影响 | 第54页 |
| ·硫酸镁添加量对转化率的影响 | 第54-55页 |
| ·反应时间对转化率的影响 | 第55页 |
| ·转化产物的检测 | 第55-57页 |
| ·酶表达方式对转化体系的影响 | 第57-58页 |
| ·共表达重组菌E.coli BL21-ADH/GDH的罐发酵培养 | 第58页 |
| ·共表达重组菌体系的放大转化 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 结论与展望 | 第60-61页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
