DNMT1基因shRNA慢病毒稳定转染KYSE150细胞株的建立及鉴定
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英汉缩略词对照表 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 1 材料与方法 | 第12-37页 |
| ·实验材料 | 第12-17页 |
| ·实验用细胞 | 第12页 |
| ·主要实验试剂及耗材 | 第12-13页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第13-14页 |
| ·主要缓冲液及琼脂胶配制 | 第14-17页 |
| ·实验方法 | 第17-37页 |
| ·plenti-U6-DNMT1的构建 | 第17-28页 |
| ·DNMT1 基因 shRNA 序列的设计 | 第17-25页 |
| ·LB培养基的制备 | 第25页 |
| ·plenti-U6 质粒的转化 | 第25页 |
| ·plenti-U6 质粒的提取及提纯 | 第25-27页 |
| ·双酶切、质粒回收及目的基因连接 | 第27-28页 |
| ·KYSE150细胞转染及筛选 | 第28-29页 |
| ·plenti-U6-DNMT1 病毒包装 | 第28页 |
| ·感染KYSE150细胞株 | 第28-29页 |
| ·筛选感染后的 KYSE150 细胞株 | 第29页 |
| ·RT-PCR | 第29-31页 |
| ·RT-PCR 引物设计 | 第29页 |
| ·细胞总 RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·逆转录反应 | 第30-31页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第31页 |
| ·Western blot | 第31-37页 |
| ·提取细胞蛋白 | 第31-32页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第32-33页 |
| ·制备 SDS-PAG 胶 | 第33页 |
| ·样品的处理及加样 | 第33-34页 |
| ·电泳 | 第34页 |
| ·转膜 | 第34-35页 |
| ·免疫杂交 | 第35页 |
| ·发光、显影、定影 | 第35-37页 |
| 2 结果 | 第37-39页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第37页 |
| ·Western blot | 第37-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| ·RNA 干扰技术原理 | 第39页 |
| ·RT-PCR结果讨论 | 第39-40页 |
| ·Western blot 结果讨论 | 第40-41页 |
| 4 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 综述 | 第45-55页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
