| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-22页 |
| ·RNA编辑的研究进展 | 第14-17页 |
| ·RNA编辑的类型 | 第14-16页 |
| ·A到I的RNA编辑 | 第15-16页 |
| ·C到U的RNA编辑 | 第16页 |
| ·RNA编辑的生物学意义 | 第16-17页 |
| ·载脂蛋白B(apoB)的研究进展 | 第17-20页 |
| ·ApoB-100与apoB-48概述 | 第17-18页 |
| ·ApoB-100 RNA的编辑 | 第18页 |
| ·参与apoB RNA编辑的相关酶 | 第18-19页 |
| ·ApoB RNA编辑的调节机制 | 第19页 |
| ·ApoB RNA编辑与高胆固醇引发的疾病治疗 | 第19-20页 |
| ·ApoB RNA编辑的研究技术 | 第20页 |
| ·慢病毒载体的研究进展 | 第20-22页 |
| ·慢病毒载体质粒系统 | 第21页 |
| ·慢病毒载体的生物学应用 | 第21-22页 |
| 2 携带apoB表达基因的慢病毒载体的构建 | 第22-39页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·质粒 | 第22-23页 |
| ·细菌菌株及细胞株 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-36页 |
| ·质粒的小量制备 | 第24-26页 |
| ·感受态E.coli DH5α的制备 | 第24-25页 |
| ·质粒转化 | 第25页 |
| ·质粒小量抽提 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r的鉴定 | 第26-27页 |
| ·酶切位点碱基序列合成 | 第27页 |
| ·重组质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r-NOBamHI的构建及鉴定 | 第27-29页 |
| ·NotI、XbaI双酶切质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r | 第27页 |
| ·酶切产物的割胶回收 | 第27-28页 |
| ·基因片段和载体片段的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28页 |
| ·质粒小量抽提 | 第28-29页 |
| ·BamHI酶切鉴定连接产物 | 第29页 |
| ·重组质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r-BamHI2的构建及鉴定 | 第29-31页 |
| ·NheI、EcoRI双酶切质粒 | 第29页 |
| ·酶切产物的割胶回收 | 第29-30页 |
| ·基因片段和载体片段连接 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·质粒小量抽提 | 第30页 |
| ·BamHI酶切鉴定连接产物 | 第30-31页 |
| ·表达质粒pCSⅡ-DsRed-Edit-GFP-Neo~r的构建及鉴定 | 第31-33页 |
| ·酶切质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r-BamHI2 | 第31页 |
| ·酶切产物的割胶回收 | 第31页 |
| ·酶切质粒pDsRed-Edit-GFP | 第31-32页 |
| ·酶切产物(片段DsRed-Edit-GFP)的割胶回收 | 第32页 |
| ·片段DsRed-Edit-GFP载体片段与的连接 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32-33页 |
| ·质粒小量抽提 | 第33页 |
| ·NheI、BamHI双酶切鉴定连接产物 | 第33页 |
| ·质粒的大量制备 | 第33-34页 |
| ·重组慢病毒的制备 | 第34-36页 |
| ·HEK-293FT细胞培养 | 第34-35页 |
| ·三质粒共转染HEK-293FT细胞 | 第35页 |
| ·病毒的收集 | 第35页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r双酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r-NOBamHI酶切鉴定结果 | 第37页 |
| ·质粒pCSⅡ-CMV-IRES-Neo~r-BamHI2双酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·质粒pCSⅡ-DsRed-Edit-GFP-Neo~r双酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3 ApoB-100 RNA编辑细胞周期的研究 | 第39-55页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·实验病毒 | 第39页 |
| ·细胞株及主要试剂 | 第39页 |
| ·主要实验仪器、设备 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-47页 |
| ·Caco-2、CBRH-7919稳定株的建立 | 第40-41页 |
| ·Caco-2、CBRH-7919细胞培养 | 第40页 |
| ·G418最优浓度的筛选 | 第40页 |
| ·慢病毒感染细胞和稳定细胞系筛选 | 第40-41页 |
| ·共聚焦显微镜(LSCM)观察apoB RNA编辑 | 第41页 |
| ·样品准备 | 第41页 |
| ·LSCM观察 | 第41页 |
| ·流式细胞仪检测(FCM)细胞周期分布 | 第41-42页 |
| ·样品准备 | 第41-42页 |
| ·PI染色 | 第42页 |
| ·FCM检测 | 第42页 |
| ·FCM检测apoB RNA编辑 | 第42页 |
| ·测序法检测apoB RNA编辑效率 | 第42-47页 |
| ·样品准备 | 第43页 |
| ·总RNA的提取与纯化 | 第43-44页 |
| ·cDNA的合成 | 第44页 |
| ·含编辑位点序列的PCR合成 | 第44-45页 |
| ·含多个编辑位点序列载体的构建 | 第45-47页 |
| ·实验结果 | 第47-55页 |
| ·共聚焦显微镜观察apoB RNA编辑 | 第47-48页 |
| ·测序检测apoB RNA编辑 | 第48页 |
| ·秋水仙素对Caco-2、CBRH-7919细胞周期的影响 | 第48-49页 |
| ·测序法检测RNA编辑效率可靠性分析 | 第49-50页 |
| ·细胞周期(秋水仙素)对apoB RNA编辑的影响 | 第50-55页 |
| ·细胞水平观察细胞周期对apoB RNA编辑的影响 | 第50-54页 |
| ·RNA水平检测细胞周期对apoB RNA编辑的影响 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| ·应用慢病毒构建稳定表达目的基因细胞株 | 第55页 |
| ·测序法检测apoB RNA编辑的效率 | 第55-56页 |
| ·ApoB RNA编辑的细胞周期研究 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第68-69页 |
