| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-23页 |
| 第一部分 水产鳗弧菌病害研究进展 | 第12-18页 |
| 1 易感染部位及影响因素 | 第12-13页 |
| 2 致病因子 | 第13-15页 |
| ·铁获取系统 | 第13-14页 |
| ·溶血素 | 第14页 |
| ·脂多糖 | 第14页 |
| ·外膜蛋白 | 第14页 |
| ·胞外蛋白酶及产物 | 第14-15页 |
| 3 致病症状 | 第15页 |
| 4 流行情况 | 第15-16页 |
| 5 综合防治 | 第16-18页 |
| 第二部份 鳗弧菌检测方法 | 第18-23页 |
| 1 血清学技术 | 第18-19页 |
| 2 单克隆抗体技术 | 第19-20页 |
| 3 荧光抗体技术 | 第20页 |
| 4 酶联免疫吸附测定法 | 第20-21页 |
| 5 核酸杂交技术 | 第21页 |
| 6 PCR 检测技术 | 第21-23页 |
| 第一章 鳗弧菌外膜蛋白 K 基因的克隆 | 第23-33页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·质粒与菌株 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| ·引物的设计 | 第23-24页 |
| ·煮沸法提取鳗弧菌总 DNA | 第24-25页 |
| ·OmpK 基因的扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第25页 |
| ·T 载体与 PCR 产物的连接 | 第25-26页 |
| ·转化及蓝白斑筛选阳性克隆 | 第26页 |
| ·质粒的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| ·OmpK 克隆结果 | 第27-28页 |
| ·T-OmpK 的 PCR 鉴定结果 | 第28-29页 |
| ·T-OmpK 酶切的鉴定结果 | 第29页 |
| ·T-OmpK 的测序鉴定 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| ·克隆目的片断的选择 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的验证 | 第32-33页 |
| 第二章 OmpK 原核表达载体的构建与表达 | 第33-45页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·质料与菌株 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-39页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·OmpK 基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第35页 |
| ·载体质粒、PCR 产物的双酶切 | 第35页 |
| ·载体片断与 PCR 产物的连接 | 第35-36页 |
| ·转化及蓝白斑筛选阳性克隆 | 第36页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 检验 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·表达方式的检测 | 第37页 |
| ·样品处理 | 第37-38页 |
| ·镍柱纯化 | 第38页 |
| ·透析[70] | 第38页 |
| ·重组蛋白的定量 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| ·达载体 pET-28-OmpK 的构建 | 第39-40页 |
| ·原核表达重组蛋白的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白表达方式鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·考马斯亮蓝测定浓度 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| ·质粒的选择 | 第44页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第44页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| 第三章 鳗弧菌外膜蛋白 K 单克隆抗体的制备及性质鉴定 | 第45-55页 |
| 1 材料 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·实验动物及细胞 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-50页 |
| ·试验动物免疫 | 第45-46页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第46-49页 |
| ·SP2/O 骨髓瘤细胞液的复苏 | 第46页 |
| ·Balb/c 小鼠免疫脾细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·Sp2/0 骨髓瘤细胞悬液的制备 | 第47页 |
| ·细胞融合 | 第47页 |
| ·HAT 选择杂交瘤 | 第47页 |
| ·融合细胞检测 | 第47-48页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆（有限稀释法） | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞株的冻存 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞株的复苏 | 第48-49页 |
| ·McAb 上清性质鉴定 | 第49页 |
| ·上清效价的检测（间接 ELISA 法） | 第49页 |
| ·上清亚型的鉴定 | 第49页 |
| ·上清交叉反应 | 第49-50页 |
| ·McAb 腹水制备与性质的鉴定 | 第50页 |
| ·杂交瘤细胞注射 | 第50页 |
| ·腹水收集 | 第50页 |
| ·腹水效价的测定 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-53页 |
| ·Balb/c 免疫小鼠血清中抗体效价的测定 | 第50-51页 |
| ·阳性孔上清抗体效价 | 第51页 |
| ·阳性孔上清亚型鉴定 | 第51页 |
| ·阳性孔上清的交叉反应 | 第51-53页 |
| ·1E41G2 腹水的效价 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·动物免疫 | 第53页 |
| ·细胞融合 | 第53-54页 |
| ·克隆化 | 第54页 |
| ·弧菌的检测方法 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 I | 第59-60页 |
| 附录 II | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |