| 摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的概述 | 第15-21页 |
| ·蜡样芽胞杆菌族 | 第15-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的特征 | 第16-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌毒素的产生和基因的转录调控 | 第17-19页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的应用 | 第19页 |
| ·Bt制剂在应用中面临的问题及解决方案 | 第19-21页 |
| ·肽聚糖水解酶 | 第21-26页 |
| ·N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶 | 第21-23页 |
| ·肽链内切酶 | 第23-24页 |
| ·N-乙酰胞壁酸酶 | 第24-25页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 | 第25-26页 |
| ·细菌中肽聚糖水解酶基因的生理功能 | 第26-31页 |
| ·参与细胞壁生长相关水解酶基因 | 第27页 |
| ·参与子细胞分裂相关水解酶基因 | 第27-28页 |
| ·参与不对称隔膜形成与芽胞皮层成熟相关水解酶基因 | 第28-29页 |
| ·参与母细胞裂解相关水解酶基因 | 第29-30页 |
| ·参与芽胞萌发相关水解酶基因 | 第30-31页 |
| ·蜡样芽胞杆菌族中肽聚糖水解酶基因 | 第31-32页 |
| ·立题依据与目的意义 | 第32-33页 |
| ·立题依据 | 第32页 |
| ·目的意义 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-50页 |
| ·实验材料 | 第33-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第33-35页 |
| ·培养基与抗生素 | 第35页 |
| ·酶与生化试剂 | 第35-36页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第36-37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-50页 |
| ·模板制备 | 第38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-40页 |
| ·酶切反应 | 第40-41页 |
| ·DNA片段的连接 | 第41页 |
| ·大肠杆菌TG1/ET热击感受态细胞的制备及转化 | 第41页 |
| ·苏云金芽胞杆菌电击所需感受态细胞的制备与转化 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| ·TRIzol法提取苏云金芽胞杆菌总RNA及纯化 | 第42-43页 |
| ·SMARTerTM RACE-PCR | 第43-44页 |
| ·同源重组缺失与插入突变体的获得 | 第44页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第44-45页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第45-46页 |
| ·凝胶阻滞 | 第46页 |
| ·Western Blot杂交分析 | 第46-47页 |
| ·苏云金芽胞杆菌细胞壁的制备 | 第47页 |
| ·水解酶与细胞壁作用位点的检测 | 第47页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第47-48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌Cry蛋白的定量 | 第48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的芽胞形成率分析 | 第48-49页 |
| ·光学显微镜观察 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-109页 |
| ·肽聚糖水解酶基因生物信息学分析 | 第50-53页 |
| ·枯草芽胞杆菌参与母细胞裂解水解酶基因 | 第50-52页 |
| ·苏云金芽胞杆菌HD73中参与母细胞裂解的候选基因 | 第52-53页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的水解酶基因CwlB的生物学特性 | 第53-78页 |
| ·HD73_2492-HD73_2495基因簇的转录分析 | 第53-54页 |
| ·cwlAB操纵子的转录调控 | 第54-58页 |
| ·CwlB生物学功能验证 | 第58-71页 |
| ·CwlB蛋白肽聚糖水解酶特性分析 | 第71-75页 |
| ·CwlB蛋白定位分析 | 第75-78页 |
| ·苏云金芽胞杆菌参与母细胞裂解候选基因的筛选与分析 | 第78-95页 |
| ·候选基因生物信息学的分析 | 第78-80页 |
| ·候选基因β-半乳糖苷酶转录活性分析 | 第80-83页 |
| ·候选基因生物学特性分析 | 第83-95页 |
| ·苏云金芽胞杆菌肽聚糖水解酶HD73_5344的功能分析 | 第95-105页 |
| ·单交换筛选参与母细胞裂解的水解酶基因 | 第95-97页 |
| ·HD73_5344基因序列及转录活性分析 | 第97-98页 |
| ·HD73_5344突变体的筛选与鉴定 | 第98-102页 |
| ·HD73_5344的功能分析 | 第102-105页 |
| ·苏云金芽胞杆菌母细胞裂解与质粒缺失之间的关系 | 第105-109页 |
| ·质粒缺失与母细胞裂解之间的关系 | 第105-107页 |
| ·不同启动子指导Cry蛋白的表达与母细胞裂解之间的关系 | 第107-109页 |
| 4 讨论 | 第109-112页 |
| ·苏云金芽胞杆菌参与母细胞裂解基因的特点 | 第109-110页 |
| ·细菌中水解酶基因的联合效应机制 | 第110页 |
| ·苏云金芽胞杆菌参与母细胞裂解的候选基因 | 第110-111页 |
| ·下一步工作展望 | 第111-112页 |
| 5 结论 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-128页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第128页 |
