| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 RNAi | 第11页 |
| 2 RNA干扰技术在昆虫中的应用 | 第11-15页 |
| ·dsRNA导入昆虫的方法 | 第11-13页 |
| ·昆虫对RNAi的敏感度 | 第13页 |
| ·RNAi在昆虫基因功能中研究现状 | 第13-14页 |
| ·RNAi在害虫防治中的研究进展 | 第14-15页 |
| 3 Rpl19基因的功能研究 | 第15页 |
| 4 橘小实蝇防治研究现状 | 第15-16页 |
| 5 橘园昆虫群落研究 | 第16-18页 |
| 6 本研究内容与目的意义 | 第18-20页 |
| ·研究内容与目的意义 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 柑橘大实蝇、意大利蜜蜂、长尾潜蝇茧蜂rpl19基因全长克隆 | 第20-43页 |
| 1 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·供试昆虫 | 第20页 |
| ·常用缓冲液、培养基及抗生素的配制 | 第20-21页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·简并引物扩增柑橘大实蝇、长尾潜蝇茧蜂rpl19基因片段及基因克隆 | 第23-25页 |
| ·RACE扩增柑橘大实蝇、长尾潜蝇茧蜂、意大利蜜蜂3'端 | 第25-27页 |
| ·RACE扩增柑橘大实蝇、长尾潜蝇茧蜂、意大利蜜蜂5'端 | 第27-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-42页 |
| ·总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR扩增相关基因片段 | 第32页 |
| ·PCR产物的的克隆与测序 | 第32-33页 |
| ·目标条带的回收及重组质粒的筛选 | 第32-33页 |
| ·序列结果与分析 | 第33页 |
| ·rpl19基因全长克隆 | 第33-39页 |
| ·3'RACE扩增结果 | 第33-34页 |
| ·3'RACE PCR产物的的克隆与测序 | 第34页 |
| ·5'RACE扩增结果 | 第34-35页 |
| ·5'RACE PCR产物的的克隆 | 第35-36页 |
| ·序列结果与分析 | 第36-39页 |
| ·rpl19基因同源性比对 | 第39-42页 |
| ·rpl19基因ORF区域核酸同源性比对 | 第39-41页 |
| ·rpl19基因氨基酸同源性比对 | 第41-42页 |
| 3 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 橘小实蝇rpl19 dsRNA对非靶标昆虫的RNAi效应研究 | 第43-59页 |
| 1 材料与方法 | 第43-51页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·供试昆虫 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·常用缓冲液、培养基及抗生素的配制 | 第43-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-51页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第44-45页 |
| ·目的片段的扩增 | 第45页 |
| ·质粒L4440及PCR产物双酶切反应 | 第45页 |
| ·质粒L4440与外源基因片段的连接 | 第45页 |
| ·连接产物的转化 | 第45-46页 |
| ·表达载体的筛选与鉴定 | 第46-47页 |
| ·dsRNA的表达 | 第47-48页 |
| ·RNAi干扰效应检测 | 第48-51页 |
| ·数据分析 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-57页 |
| ·dsRNA表达效果检测 | 第51页 |
| ·dsRNA摄入效果检测 | 第51-53页 |
| ·喂食Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后橘小实蝇rpl19表达量 | 第53-54页 |
| ·喂食Bmrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后柑橘大实蝇rpl19表达量 | 第54-55页 |
| ·喂食Dlrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后长尾潜蝇茧蜂rpl19表达量 | 第55-56页 |
| ·喂食Amrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后意大利蜜蜂rpl19表达量 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
