| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-14页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的起源和分类 | 第9页 |
| 2 猪繁殖与呼吸综合征病毒生物学特性 | 第9-10页 |
| ·病毒的形态特征 | 第9-10页 |
| ·病毒的培养特性 | 第10页 |
| 3 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究 | 第10-12页 |
| ·病毒的基因组结构与特点 | 第10页 |
| ·病毒基因组编码的蛋白的结构、功能 | 第10-12页 |
| ·主要结构蛋白 | 第11页 |
| ·PRRSV 的分子遗传变异 | 第11-12页 |
| 4 RT-PCR 检测技术 | 第12-13页 |
| 5 PRRSV 与其他病原体的相互作用 | 第13-14页 |
| 第2章 HP/LP-PRRSV 二重 FQ-PCR 诊断方法的建立 | 第14-30页 |
| 1 材料 | 第15-16页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第15页 |
| ·菌（毒）株 | 第15页 |
| ·常用溶液及培养基 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-22页 |
| ·引物的设计和合成 | 第16页 |
| ·PRRSV 模版的制备 | 第16-20页 |
| ·PRRSV 核酸的提取 | 第16-17页 |
| ·反转录获得 cDNA | 第17页 |
| ·二重 RT-PCR 扩增 | 第17-18页 |
| ·回收 PCR 产物 | 第18-19页 |
| ·回收产物与 pGEM-T Easy 载体的连接 | 第19页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组质粒的特异性酶切鉴定与 PCR 鉴定 | 第20页 |
| ·二重 FQ-PCR 方法反应条件的优化 | 第20-21页 |
| ·二重 FQ-PCR 扩增反应 | 第21页 |
| ·二重 FQ-PCR 敏感性试验及标准曲线的建立 | 第21页 |
| ·特异性试验 | 第21页 |
| ·重复性试验 | 第21页 |
| ·二重 FQ-PCR 与二重 RT-PCR 敏感性比较 | 第21页 |
| ·临床应用试验 | 第21-22页 |
| 3 结果 | 第22-28页 |
| ·重组质粒鉴定结果 | 第22页 |
| ·质粒 DNA 浓度的测定 | 第22页 |
| ·二重荧光定量 RT-PCR 方法反应条件的优化 | 第22-23页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 的敏感性及标准曲线 | 第23-25页 |
| ·特异性试验 | 第25-26页 |
| ·重复性 | 第26-27页 |
| ·二重 FQ-PCR 与二重 RT-PCR 敏感性比较 | 第27页 |
| ·临床样品检测结果 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 河南分离株 NSP2 和 ORF5-7 基因变异分析 | 第30-48页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第31页 |
| ·病料和毒株 | 第31-33页 |
| 2 方法 | 第33-35页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33页 |
| ·PRRSV 模版的制备 | 第33-35页 |
| ·PRRSV 核酸的提取 | 第33页 |
| ·反转录获得 cDNA | 第33页 |
| ·RT-PCR 扩增及 PCR 产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物回收 | 第34页 |
| ·回收的 DNA 片段与 pGEM-T Easy 载体的连接 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第35页 |
| ·序列的测定拼接和遗传进化分析 | 第35页 |
| ·推导编码氨基酸的基本特性比较 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-46页 |
| ·Nsp2 基因和 ORF5 基因的 RT-PCR 扩增结果 | 第35-36页 |
| ·Nsp2 基因和 ORF5 基因测序和序列拼接 | 第36页 |
| ·Nsp2 基因/ORF5 基因核苷酸序列的分析 | 第36-39页 |
| ·依据 Nsp2 基因和 ORF5 基因核苷酸序列的遗传演化分析 | 第39-42页 |
| ·Nsp2 基因/ORF5 基因推导编码氨基酸的比较 | 第42-44页 |
| ·核苷酸编码的氨基酸一级结构比较 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 缩略语词汇表 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第56页 |
