| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| ·烟草基因组学研究进展 | 第12页 |
| ·突变体与突变体库 | 第12-15页 |
| ·突变体的应用价值 | 第12-13页 |
| ·突变体库的构建 | 第13-14页 |
| ·突变体的鉴定 | 第14-15页 |
| ·TILLING 技术基本原理及特点 | 第15-16页 |
| ·TILLING 技术方法的发展 | 第16-20页 |
| ·LICOR-TILLING 筛选技术 | 第16-17页 |
| ·CE-TILLING 筛选技术 | 第17-18页 |
| ·CSCE-TILLING 筛选技术 | 第18-19页 |
| ·HRM-TILLING 筛选技术 | 第19页 |
| ·Sequencing-TILLING 筛选技术 | 第19-20页 |
| ·国内外 TILLING 在植物研究现状 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的意义、主要内容和技术路线 | 第21-23页 |
| ·目的意义 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 M2 代群体建立以及表型分析 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·方法 | 第23页 |
| ·M2 代种植 | 第23页 |
| ·M2 代性状调查 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-26页 |
| ·EMS 诱变的 M2 代外观突变类型 | 第23-25页 |
| ·M2 代性状分离情况统计 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 烟草 LICOR-TILLING 体系建立及 NTLS 基因筛选 | 第28-38页 |
| ·材料与仪器 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·CEL I 酶提取 | 第28-29页 |
| ·CEL I 内切酶粗提产物透析 | 第29-30页 |
| ·透析蛋白液的收集和分装 | 第30页 |
| ·突变单株 DNA 提取 | 第30页 |
| ·DNA 样品均一化和 DNA 四倍池的建立 | 第30页 |
| ·NtLS 基因生物信息学分析以及引物设计 | 第30页 |
| ·PCR 扩增及异源双链的形成 | 第30-31页 |
| ·CEL I 酶切重组异源双链及酶切产物的纯化 | 第31页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第31页 |
| ·突变单体单株 PCR 产物凝胶回收 | 第31-32页 |
| ·测序验证及突变频率分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-37页 |
| ·NtLS 生物信息分析以及引物设计 | 第32-33页 |
| ·引物扩增效率及最适 TM 值摸索 | 第33页 |
| ·烟草 TILLING 最适模板浓度 | 第33-34页 |
| ·DNA 提取、浓度均一化 | 第34页 |
| ·荧光标记引物用量对检测结果的影响 | 第34-35页 |
| ·TILLING 筛选体系 CELⅠ酶切割杂合双链 | 第35页 |
| ·TILLING 体系筛选四倍库结果 | 第35-36页 |
| ·确定 NtLS 突变单株及突变频率 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 毛细管电泳 TILLING 体系建立 | 第38-44页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-40页 |
| ·PCR 扩增及异源双链的重组 | 第39页 |
| ·CEL I 酶切重组异源双链 | 第39-40页 |
| ·酶切产物稀释 | 第40页 |
| ·毛细管电泳检测 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·毛细管电泳筛选体系 CEL I 酶切异源双链 | 第40-41页 |
| ·毛细管电泳筛选体系 PCR 产物稀释优化 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 M3 代 NTPAL4 突变体基因型鉴定 | 第44-48页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| ·突变单株的种植 | 第44页 |
| ·CE-TILLING 鉴定 NtPAL4 基因型 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·NtPAL4 突变体田间观察 | 第45页 |
| ·NtPAL4 基因型鉴定 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第六章 结论 | 第48-50页 |
| ·结论 | 第48页 |
| ·创新点 | 第48-49页 |
| ·工作展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
