| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-38页 |
| 1 RNAi的发现 | 第14-15页 |
| 2 RNAi的作用机制及特点 | 第15-19页 |
| ·RNAi系统的组成 | 第15-17页 |
| ·RNAi的作用过程 | 第17页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第17-19页 |
| 3 siRNA的脱靶效应(off-target effect) | 第19-22页 |
| ·非靶基因抑制作用 | 第19-20页 |
| ·非特异性免疫反应 | 第20-21页 |
| ·RNAi的饱和效应 | 第21页 |
| ·减少脱靶效应的策略 | 第21-22页 |
| 4 siRNA体内应用的瓶颈问题 | 第22-26页 |
| ·稳定性 | 第22-24页 |
| ·体内递送 | 第24-26页 |
| ·安全性和有效性 | 第26页 |
| 5 RNAi在肿瘤治疗中的应用 | 第26-31页 |
| ·RNAi作用于肿瘤发生相关通路 | 第26-27页 |
| ·RNAi作用于细胞周期调控相关基因 | 第27-28页 |
| ·RNAi作用于细胞凋亡相关基因 | 第28页 |
| ·RNAi作用于肿瘤侵袭和转移相关基因 | 第28-29页 |
| ·RNAi作用于肿瘤血管形成相关基因 | 第29页 |
| ·RNAi作用于肿瘤耐药性相关基因 | 第29页 |
| ·RNAi肿瘤治疗药物的临床研究进展 | 第29-31页 |
| 参考文献 | 第31-38页 |
| 第二章 不对称siRNA体外抑制bcl-2基因表达及其脱靶效应的研究 | 第38-63页 |
| 1 引言 | 第38-39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-49页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·HeLaB2细胞的培养 | 第40页 |
| ·siRNA和asiRNA序列的设计和合成 | 第40页 |
| ·Q-RT-PCR检测siRNA/asiRNA转染后细胞中bcl-2 mRNA的表达水平 | 第40-43页 |
| ·流式细胞术检测siRNA/asiRNA转染后细胞中Bcl-2蛋白的表达水 | 第43-44页 |
| ·CCK-8检测siRNA/asiRNA转染对细胞活性的影响 | 第44-45页 |
| ·转染siRNA/asiRNA后细胞基因表达谱芯片的研究 | 第45页 |
| ·siRNA/asiRNA正义链脱靶效应的研究 | 第45-48页 |
| ·ELISA检测转染siRNA/asiRNA后细胞因子的表达 | 第48-49页 |
| ·统计分析方法 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-59页 |
| ·靶向bcl-2基因的siRNA及asiRNA序列 | 第49-50页 |
| ·转染siRNA/asiRNA对bcl-2基因mRNA表达的影响 | 第50-51页 |
| ·转染siRNA/asiRNA对细胞中Bcl-2蛋白表达水平的影响 | 第51-52页 |
| ·转染siRNA/asiRNA对HeLaB2细胞活性的影响 | 第52-53页 |
| ·转染siRNA/asiRNA后细胞基因表达谱芯片分析 | 第53-57页 |
| ·asiRNA能减少正义链引起的脱靶效应 | 第57-58页 |
| ·转染siRNA/asiRNA对细胞因子的影响 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 第三章 靶向bcl-2的不对称siRNA对肿瘤细胞多药耐药的逆转 | 第63-75页 |
| 1 引言 | 第63-64页 |
| 2 材料与方法 | 第64-68页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·CCK-8检测耐药细胞对化疗药的敏感性 | 第64-65页 |
| ·流式细胞仪检测耐药细胞中Bcl-2蛋白表达水平 | 第65-66页 |
| ·Q-RT-PCR检测asiRNA转染后耐药细胞中bcl-2 mRNA的表达水平 | 第66页 |
| ·流式细胞术检测asiRNA转染后耐药细胞中Bcl-2蛋白的表达水平 | 第66-67页 |
| ·CCK-8检测asiRNA转染耐药细胞后化疗药敏感性的变化 | 第67-68页 |
| ·统计分析方法 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-72页 |
| ·细胞对化疗药物的敏感性 | 第68-69页 |
| ·耐药细胞中Bcl-2蛋白的表达 | 第69-70页 |
| ·转染asiRNA后耐药细胞中bcl-2基因mRNA水平的变化 | 第70-71页 |
| ·转染asiRNA后耐药细胞中Bcl-2蛋白水平的变化 | 第71-72页 |
| ·转染asiRNA后耐药细胞对化疗药敏感性的变化 | 第72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 第四章 不对称siRNA的化学修饰及体内实验研究 | 第75-100页 |
| 1 引言 | 第75-76页 |
| 2 材料和方法 | 第76-85页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·化学修饰及特殊标记asiRNA的合成 | 第77-78页 |
| ·化学修饰asiRNA的转染 | 第78页 |
| ·流式细胞术检测转染后细胞中Bcl-2蛋白表达水平 | 第78-79页 |
| ·血清稳定性 | 第79页 |
| ·PEG-PE-DOPS脂质胶束的制备 | 第79-80页 |
| ·PEG-PE-DOPS-rhEndostatin(PDE)/asiRNA复合物的制备 | 第80页 |
| ·PDE/asiRNA复合物的表征研究 | 第80-81页 |
| ·PDE/asiRNA复合物的血清稳定性 | 第81页 |
| ·细胞毒性 | 第81-82页 |
| ·ELISA方法检测PDE/asiRNA的体内稳定性 | 第82页 |
| ·荧光标记asiRNA的体内分布 | 第82-83页 |
| ·PDE/asiRNA复合物对小鼠肿瘤模型的抑制作用 | 第83-85页 |
| ·PDE/asiRNA复合物的小鼠急性毒性研究 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-95页 |
| ·化学修饰和特殊标记asiRNA的序列 | 第85-86页 |
| ·化学修饰asiRNA的干扰效果 | 第86-87页 |
| ·血清稳定性比较 | 第87页 |
| ·凝胶电泳阻滞 | 第87-88页 |
| ·PDE/asiRNA复合物的形态和表征 | 第88-89页 |
| ·PDE/siRNA复合物的血清稳定性 | 第89页 |
| ·细胞毒性 | 第89-90页 |
| ·ELISA方法检测QasiRNA在血液中的稳定性 | 第90-91页 |
| ·荧光标记的asiRNA的体内稳定性及组织分布 | 第91-92页 |
| ·PDE递送asiRNA的体内抑瘤作用 | 第92-95页 |
| ·asiRNA/PDE复合物的急性毒性 | 第95页 |
| 4 讨论 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 第五章 富硒转内皮抑素双歧杆菌的抑瘤效果研究 | 第100-111页 |
| 1 引言 | 第100-101页 |
| 2 材料和方法 | 第101-104页 |
| ·菌株 | 第101页 |
| ·主要试剂 | 第101页 |
| ·转endostatin的长双歧杆菌的富硒培养 | 第101页 |
| ·Se-B.longum-En生长曲线的测定 | 第101页 |
| ·实验动物及肿瘤模型的建立 | 第101-102页 |
| ·Se-B.longum-En的肿瘤抑制作用 | 第102-103页 |
| ·Se-B.longum-En对荷瘤小鼠生存期的影响 | 第103页 |
| ·硒在动物体内的吸收和分布 | 第103页 |
| ·数据统计分析 | 第103-104页 |
| 3 结果 | 第104-108页 |
| ·不同浓度的硒对B.longum-En菌株生长的影响 | 第104页 |
| ·富硒B.longum-En的生长曲线测定 | 第104-105页 |
| ·Se-B.longum-En对小鼠H22肝癌模型的抑制作用 | 第105-106页 |
| ·Se-B.longum-En对荷H22肝癌小鼠生存期的影响 | 第106-107页 |
| ·Se-B.longum-En给药后硒在实验动物体内的分布 | 第107-108页 |
| 4 讨论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-111页 |
| 博士研究生期间发表的论著和申请的专利 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
