| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| ·立题背景 | 第11-12页 |
| ·乳酸菌 | 第12页 |
| ·细菌素 | 第12-13页 |
| ·ABC转运蛋白 | 第13-19页 |
| ·ABC转运蛋白的结构 | 第13-15页 |
| ·ABC转运蛋白的作用机理 | 第15-17页 |
| ·ABC转运蛋白的分类 | 第17-19页 |
| ·ABC转运蛋白的研究现状及展望 | 第19-20页 |
| ·本实验的研究目的和研究内容 | 第20-22页 |
| ·研究目的 | 第20页 |
| ·研究内容 | 第20页 |
| ·主要技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 植物乳杆菌ZJ316基因plnH的克隆 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌株及质粒 | 第22页 |
| ·主要培养基 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第23-25页 |
| ·DNA提取试剂 | 第23-24页 |
| ·质粒提取试剂 | 第24页 |
| ·核酸电泳溶液 | 第24-25页 |
| ·其他试剂 | 第25页 |
| ·主要工具酶 | 第25页 |
| ·试剂盒 | 第25页 |
| ·核酸分子量标准 | 第25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·菌种的培养 | 第26页 |
| ·植物乳杆菌ZJ316总DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR反应体系 | 第27-28页 |
| ·PCR反应条件 | 第28页 |
| ·PCR产物凝胶电泳 | 第28页 |
| ·PCR产物回收 | 第28-29页 |
| ·目的片段与T载体的链接 | 第29页 |
| ·感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·转化子的鉴定 | 第30-31页 |
| ·质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·PCR鉴定 | 第31页 |
| ·酶切鉴定 | 第31页 |
| ·DNA测序 | 第31页 |
| ·实验结果与分析 | 第31-34页 |
| ·PCR的扩增 | 第31-32页 |
| ·克隆载体pMD19-plnH基因的构建 | 第32-34页 |
| ·DNA序列 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第36-46页 |
| ·序列 | 第36页 |
| ·工具和软件 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-44页 |
| ·PlnH的基本信息 | 第37页 |
| ·PlnH的理化性质分析 | 第37页 |
| ·PlnH的二级结构 | 第37-38页 |
| ·三级结构预测 | 第38-39页 |
| ·亲疏水性分析 | 第39页 |
| ·功能位点分析 | 第39-40页 |
| ·功能域预测 | 第40-42页 |
| ·信号肽的分析 | 第42-43页 |
| ·蛋白序列多重比对 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 ABC转运蛋白基因plnH在大肠杆菌中的表达 | 第46-61页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·菌株及质粒 | 第46页 |
| ·主要培养基 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46-48页 |
| ·SDS-PAGE电泳使用溶液 | 第46-47页 |
| ·其他生化试剂 | 第47页 |
| ·试剂盒 | 第47页 |
| ·核酸及蛋白质分子量标准 | 第47-48页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第48页 |
| ·仪器设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-54页 |
| ·重组质粒pET28a-plnH基因的构建 | 第48-51页 |
| ·加酶切位点的目的基因获得 | 第48-49页 |
| ·克隆的plnH基因的双酶切 | 第49页 |
| ·载体pET28a质粒DNA的双酶切 | 第49页 |
| ·沉淀回收 | 第49-50页 |
| ·表达载体的连接 | 第50页 |
| ·连接产物的转化 | 第50页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·外源基因测序验证 | 第51页 |
| ·plnH基因的外源诱导表达 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第51-52页 |
| ·plnH外源表达的条件优化 | 第52-54页 |
| ·18℃低温的第一次诱导 | 第52-53页 |
| ·温度诱导 | 第53页 |
| ·IPTG诱导 | 第53页 |
| ·不同OD值的诱导 | 第53页 |
| ·不同时间的诱导 | 第53页 |
| ·条件优化后的诱导 | 第53-54页 |
| ·实验结果与分析 | 第54-60页 |
| ·重组质粒pET28a-plnH基因的构建 | 第54页 |
| ·表达载体pET28a-plnH的鉴定 | 第54-56页 |
| ·plnH基因的外源诱导表达 | 第56-60页 |
| ·18℃低温的第一次诱导 | 第56页 |
| ·温度诱导 | 第56-57页 |
| ·IPTG诱导 | 第57-58页 |
| ·IPTG在不同OD_(600)值加入的诱导 | 第58页 |
| ·不同时间的诱导 | 第58-59页 |
| ·条件优化后的诱导 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 植物乳杆菌ZJ316细菌素ABC转运蛋白的分离纯化 | 第61-66页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验菌株 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·蛋白质分子量标准 | 第62页 |
| ·Ni~(2+)柱亲和层析纯化试剂 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·包涵体的获得 | 第62-63页 |
| ·金属螯合亲和层析纯化目的蛋白 | 第63页 |
| ·重组蛋白的柱上复性 | 第63页 |
| ·重组蛋白PlnH的逐级透析复性 | 第63页 |
| ·实验结果与分析 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 第六章 结论与展望 | 第66-69页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录A 植物乳杆菌ZJ316基因plnH序列 | 第75-76页 |
| 附录B 植物乳杆菌ZJ316蛋白PlnH氨基酸序列 | 第76-77页 |
| 附录C 植物乳杆菌ZJ316PlnH的二级结构 | 第77-78页 |
| 附录D 氨基酸序列比对 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
