| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| ·miRNA | 第10页 |
| ·植物 microRNA 的生物合成 | 第10-11页 |
| ·植物 microRNA 调节靶基因的机制 | 第11-12页 |
| ·植物 miRNA 的特点 | 第12页 |
| ·miRNA у植物生长发育 | 第12页 |
| ·miRNA у非生物逆境胁迫 | 第12-15页 |
| ·低氮胁迫 | 第13页 |
| ·低磷胁迫 | 第13-14页 |
| ·缺硫胁迫 | 第14页 |
| ·干旱胁迫 | 第14页 |
| ·低温胁迫 | 第14-15页 |
| ·高盐胁迫 | 第15页 |
| ·其它逆境胁迫 | 第15页 |
| ·植物 miR528 研究进展 | 第15-20页 |
| ·miR528 | 第15-16页 |
| ·靶基因 | 第16-20页 |
| 2 引言 | 第20-22页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第20页 |
| ·本课题研究的内容及技术路线 | 第20-22页 |
| ·研究的内容 | 第20-21页 |
| ·本研究所采取的技术路线 | 第21-22页 |
| 3 材料和方法 | 第22-48页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-48页 |
| ·5′RACE 验证 miR528a 的靶基因 | 第22-27页 |
| ·漆酶 ZmLac5 基因过表达载体构建у拟南芥转化 | 第27-34页 |
| ·ZmLac5 基因克隆 | 第27-28页 |
| ·序列分析 | 第28页 |
| ·植物过表达载体的构建 | 第28-30页 |
| ·pCUB-Ubi::ZmLac5 的重组连接、转化у验证 | 第30-32页 |
| ·pCUB-Ubi::ZmLac5 过表达载体转化农杆菌 | 第32-33页 |
| ·花序浸润法转化拟南芥 | 第33页 |
| ·除草剂筛选 | 第33页 |
| ·转基因植株 PCR 检测 | 第33-34页 |
| ·MIR528a 基因过表达载体构建у拟南芥转化 | 第34-40页 |
| ·MIR528a 基因插入片段的获得 | 第34-35页 |
| ·CPB 质粒载体双酶切线性片段的获得 | 第35-36页 |
| ·pCPB-35S::MIR528a 载体的构建у转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒 pCPB-35S::MIR528a 的验证 | 第37-38页 |
| ·pCPB-35S::MIR528a 过表达载体热击转入农杆菌 | 第38-39页 |
| ·pCPB-35S::MIR528a 过表达载体转化拟南芥 | 第39页 |
| ·除草剂筛选 | 第39页 |
| ·转基因植株 PCR 检测 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR 验证 miR528 у其靶基因的表达关系 | 第40-48页 |
| ·种子消毒及发芽 | 第40页 |
| ·玉米幼苗正常培养 | 第40页 |
| ·低硝酸盐处理 | 第40-42页 |
| ·其他 7 个逆境处理 | 第42-43页 |
| ·生物量测定 | 第43-44页 |
| ·花青苷的提取及检测 | 第44页 |
| ·组织样品取样及总 RNA 提取 | 第44页 |
| ·miR528 及靶基因荧光定量 PCR 检测 | 第44-48页 |
| 4 结果与分析 | 第48-68页 |
| ·5′RACE 验证 miR528a 的靶基因 | 第48-51页 |
| ·漆酶 ZmLac5 基因过表达载体构建у拟南芥转化 | 第51-58页 |
| ·玉米根部组织总 RNA 提取 | 第51-52页 |
| ·序列比较及同源性分析 | 第52-53页 |
| ·植物过表达载体的构建及鉴定 | 第53-55页 |
| ·线性质粒 CUB 的获得 | 第53页 |
| ·表达载体外源目的基因插入片段的获得 | 第53-54页 |
| ·过表达载体 pCUB-Ubi::ZmLac5 的构建及鉴定 | 第54-55页 |
| ·植物过表达载体转化农杆菌 | 第55-56页 |
| ·除草剂筛选转化苗 | 第56页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第56-58页 |
| ·MIR528a 基因过表达载体构建у拟南芥转化 | 第58-62页 |
| ·表达载体外源目的基因插入片段的获得 | 第58页 |
| ·目的片段的扩增 | 第58页 |
| ·目的片段的双酶切 | 第58页 |
| ·线性质粒 CPB 的获得 | 第58-59页 |
| ·CPB 质粒 DNA 的提取 | 第58-59页 |
| ·线性质粒 CPB 的获得 | 第59页 |
| ·过表达载体 pCPB-35S::MiR528a 的构建及鉴定 | 第59-61页 |
| ·pCPB-35S::MIR528a 过表达载体转化农杆菌 | 第61页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR 验证 miR528 у其靶基因的表达关系 | 第62-68页 |
| ·低氮胁迫н玉米幼苗表型反应 | 第62-63页 |
| ·30 个组织样品总 RNA 提取 | 第63-64页 |
| ·miR528a 及靶基因荧光定量 PCR 检测 | 第64-68页 |
| 5 讨论 | 第68-72页 |
| ·5′RACE 验证 miR528a 的靶基因 | 第68-69页 |
| ·RNA 的质量控制 | 第68页 |
| ·5′RACE 的实验控制 | 第68页 |
| ·miR528 的靶基因 | 第68-69页 |
| ·漆酶 ZmLac5 基因过表达载体构建у拟南芥转化 | 第69-70页 |
| ·MIR528a 基因过表达载体构建у拟南芥转化 | 第70页 |
| ·RT-PCR 验证 miR528a у其靶基因的表达关系 | 第70-72页 |
| ·取样部位的选择 | 第70页 |
| ·miR528a 及靶基因在响应非生物逆境中的作用机制 | 第70-72页 |
| 全文结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
| 成果清单 | 第82页 |
