| 中文摘要 | 第1-18页 |
| ABSTRACT | 第18-23页 |
| 符号说明 | 第23-24页 |
| 前言 | 第24-30页 |
| 第一部分 聚阳离子多层纳米粒的研究 | 第30-44页 |
| 一、实验材料 | 第31-33页 |
| 1 试剂与药品 | 第31页 |
| 2 主要仪器 | 第31页 |
| 3 细胞 | 第31-32页 |
| 4 试剂配制 | 第32-33页 |
| 二、实验方法 | 第33-35页 |
| 1 Pro/DNA二元复合物纳米粒的制备 | 第33页 |
| 2 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的制备 | 第33页 |
| 3 组装过程中影响因素的考察 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶的制备及使用方法 | 第33页 |
| ·氮磷比(N/P)对Pro/DNA二元复合物形成的影响 | 第33页 |
| ·外层DNA用量对DNA/Pro/DNA形成的影响 | 第33页 |
| ·PEI用量对PEI/DNA/Pro/DNA形成的影响 | 第33-34页 |
| 4 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的理化性质 | 第34页 |
| 5 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的抗核酸酶能力考察 | 第34页 |
| ·PEI/DNA/Pro/DNA中DNA提取方法的选择 | 第34页 |
| ·抗核酸酶能力 | 第34页 |
| 6 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的细胞毒性实验 | 第34-35页 |
| 7 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的体外转染实验 | 第35页 |
| 8 统计分析 | 第35页 |
| 三、实验结果 | 第35-42页 |
| 1 组装过程中各因素的影响 | 第35-37页 |
| ·N/P对Pro/DNA二元复合物形成的影响 | 第35-36页 |
| ·外层DNA用量对DNA/Pro/DNA形成的影响 | 第36页 |
| ·PEI用量对DNA/Pro/DNA形成的影响 | 第36-37页 |
| 2 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的理化性质 | 第37-38页 |
| 3 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的抗核酸酶能力考察 | 第38-40页 |
| ·不同浓度肝素提取PEI/DNA/Pro/DNA纳米粒中DNA的结果 | 第38-39页 |
| ·抗核酸酶能力 | 第39-40页 |
| 4 PEI/DNA/Pro/DNA自组装纳米粒的细胞毒性结果 | 第40页 |
| 5 体外转染结果 | 第40-42页 |
| 四、讨论 | 第42-44页 |
| 第二部分 脂质体包裹PEI/DNA复合物纳米粒的研究 | 第44-59页 |
| 一、实验材料 | 第44-45页 |
| 1 试剂与药品 | 第45页 |
| 2 主要仪器 | 第45页 |
| 二、实验方法 | 第45-48页 |
| 1 DNA含量测定方法的建立 | 第45-46页 |
| ·PicoGreen工作液配制 | 第45页 |
| ·激发、发射波长的选择 | 第45-46页 |
| ·标准曲线的建立 | 第46页 |
| ·精密度试验 | 第46页 |
| ·回收率试验 | 第46页 |
| 2 PEI/DNA复合物的制备 | 第46页 |
| 3 空白阴离子脂质体的制备 | 第46-47页 |
| ·空白阴离子脂质体的单因素考察 | 第46-47页 |
| ·正交设计试验 | 第47页 |
| ·处方重现性考察 | 第47页 |
| 4 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的制备 | 第47页 |
| 5 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的理化性质 | 第47页 |
| 6 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的抗核酸酶能力考察 | 第47页 |
| 7 血浆稳定性考察 | 第47页 |
| 8 体外释放实验 | 第47-48页 |
| 9 细胞毒性实验 | 第48页 |
| 10 体外转染实验 | 第48页 |
| 三、实验结果 | 第48-57页 |
| 1 DNA含量测定方法的考察结果 | 第48-50页 |
| ·激发、发射波长的确定 | 第48-49页 |
| ·标准曲线的建立 | 第49页 |
| ·精密度实验 | 第49页 |
| ·回收率实验 | 第49-50页 |
| 2 PEI/DNA处方考察结果 | 第50-51页 |
| 3 空白阴离子脂质体处方考察结果 | 第51-53页 |
| ·单因素考察结果 | 第51页 |
| ·正交设计结果 | 第51-53页 |
| ·重现性考察结果 | 第53页 |
| 4 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的处方考察结果 | 第53页 |
| 5 纳米粒的理化性质 | 第53-55页 |
| 6 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的抗核酸酶能力 | 第55页 |
| 7 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的血浆稳定性 | 第55-56页 |
| 8 体外释放结果 | 第56页 |
| 9 Lipo/PEI/DNA三元纳米粒的细胞毒性评价结果 | 第56-57页 |
| 10 体外细胞转染结果 | 第57页 |
| 四、讨论 | 第57-59页 |
| 第三部分 新型阳离子LHLN脂质体的研究 | 第59-72页 |
| 一、实验材料 | 第59-60页 |
| 1 试剂与药品 | 第59-60页 |
| 2 主要仪器 | 第60页 |
| 3 细胞 | 第60页 |
| 4 动物 | 第60页 |
| 二、实验方法 | 第60-63页 |
| 1 阳离子脂质体的制备 | 第60页 |
| 2 载基因LHLN脂质体的制备 | 第60-61页 |
| 3 LHLN脂质体的DNA结合能力考察 | 第61页 |
| ·DNA结合能力的定性考察 | 第61页 |
| ·DNA结合能力的定量考察 | 第61页 |
| 4 LHLN脂质体的形态、粒径和表面电位的测定 | 第61页 |
| 5 抗核酸酶能力考察 | 第61-62页 |
| ·核酸酶浓度的影响 | 第61页 |
| ·孵育时间的影响 | 第61-62页 |
| 6 血浆稳定性考察 | 第62页 |
| 7 载基因LHLN脂质体细胞毒性考察 | 第62页 |
| 8 载基因LHLN脂质体体外细胞转染能力考察 | 第62-63页 |
| 9 载基因LHLN脂质体的大鼠肺部给药体内转染实验 | 第63页 |
| 10 数据统计分析 | 第63页 |
| 三、实验结果 | 第63-70页 |
| 1 LHLN脂质体及载基因LHLN脂质体理化性质 | 第63-64页 |
| 2 LHLN脂质体的DNA结合能力考察结果 | 第64-65页 |
| ·复合物凝胶电泳分析结果 | 第64-65页 |
| ·DNA结合率的荧光定量结果 | 第65页 |
| 3 载基因LHLN脂质体抗核酸酶能力考察结果 | 第65-66页 |
| 4 血浆稳定性考察结果 | 第66页 |
| 5 载基因LHLN脂质体细胞毒性考察结果 | 第66-67页 |
| 6 载基因LHLN脂质体体外细胞转染结果 | 第67-69页 |
| 7 载基因LHLN脂质体大鼠肺部给药后体内转染结果 | 第69-70页 |
| 四、讨论 | 第70-72页 |
| 第四部分 羧甲基壳聚糖修饰多功能载基因纳米粒的研究 | 第72-88页 |
| 一、实验材料 | 第73-74页 |
| 1 试剂与药品 | 第73-74页 |
| 2 主要仪器 | 第74页 |
| 3 细胞 | 第74页 |
| 4 动物 | 第74页 |
| 二、实验方法 | 第74-77页 |
| 1 CMCS-CLDPD的制备 | 第74页 |
| 2 CMCS-CLDPD的形态、粒径及电位的测定 | 第74-75页 |
| 3 CMCS-CLDPD的pH敏感性考察 | 第75页 |
| 4 CMCS-CLDPD的抗核酸酶能力考察 | 第75页 |
| 5 CMCS-CLDPD的血浆稳定性考察 | 第75页 |
| 6 CMCS-CLDPD的细胞毒性 | 第75-76页 |
| 7 CMCS-CLDPD的体外基因转染 | 第76页 |
| 8 CMCS-CLDPD的体内基因转染研究 | 第76-77页 |
| 三、实验结果 | 第77-85页 |
| 1 CMCS-CLDPD制备过程中主要影响因素的考察结果 | 第77-78页 |
| ·阳离子LHLN脂质体与DPD的质量比对CLDPD的影响 | 第77-78页 |
| ·CMCS与CLDPD的质量比对CMCS-CLDPD的影响 | 第78页 |
| 2 CMCS-CLDPD的理化性质 | 第78-80页 |
| 3 CMCS-CLDPD的pH敏感性考察结果 | 第80-81页 |
| 4 CMCS-CLDPD的抗核酸酶能力考察结果 | 第81页 |
| 5 CMCS-CLDPD的血浆稳定性考察结果 | 第81-82页 |
| 6 CMCS-CLDPD的细胞毒性考察结果 | 第82-83页 |
| 7 CMCS-CLDPD的体外转染结果 | 第83-84页 |
| 8 CMCS-CLDPD的体内转染结果 | 第84-85页 |
| 四、讨论 | 第85-88页 |
| 总结与展望 | 第88-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第98-99页 |
| 文献综述 | 第99-142页 |
| REFERENCE | 第127-142页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第142页 |
