| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·细胞周期概述 | 第10-15页 |
| ·细胞周期检验点 | 第10-11页 |
| ·细胞周期检验点相关蛋白 | 第11页 |
| ·纺锤体检验点 | 第11-15页 |
| ·蛋白磷酸酶研究进展 | 第15-18页 |
| ·蛋白磷酸酶的分类 | 第15-16页 |
| ·PPM家族相关背景 | 第16-17页 |
| ·PPM1A蛋白磷酸酶及功能 | 第17-18页 |
| ·基因打靶简介 | 第18-25页 |
| ·基因打靶的类型 | 第19-20页 |
| ·条件敲除载体构建流程 | 第20-22页 |
| ·正负双向选择系统概述 | 第22-23页 |
| ·PPM1A基因的敲除载体设计策略 | 第23-25页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第25-29页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-45页 |
| ·PPM1A对Mps1去磷酸化的作用 | 第29-32页 |
| ·PPM1A和Mps1的表达 | 第29页 |
| ·提取细胞总蛋白 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第29-31页 |
| ·Western blot检测分析 | 第31-32页 |
| ·PPM1A基因条件敲除小鼠模型制作 | 第32-45页 |
| ·构建重组质粒PL253、PL451、PL452 | 第32-37页 |
| ·Retrieve BAC上A-B之间序列到PL253中 | 第37-38页 |
| ·第二次同源重组 | 第38-39页 |
| ·利用Cre-LoxP系统去除Neo序列 | 第39页 |
| ·第三次同源重组 | 第39-40页 |
| ·载体转化至DH5α中 | 第40页 |
| ·假载体的构建 | 第40-41页 |
| ·载体质粒大提 | 第41-42页 |
| ·载体线性化 | 第42页 |
| ·电转载体至ES细胞 | 第42-43页 |
| ·筛选鉴定阳性细胞克隆 | 第43页 |
| ·挑取克隆及PCR验证 | 第43-44页 |
| ·显微注射获取嵌合体小鼠 | 第44-45页 |
| 4 结果 | 第45-52页 |
| ·PPM1A对Mps1去磷酸化的作用 | 第45-46页 |
| ·PPM1A条件敲除小鼠模型的制作 | 第46-52页 |
| ·PPM1A条件敲除载体构建 | 第46-49页 |
| ·同源重组ES细胞的筛选与鉴定 | 第49-50页 |
| ·嵌合体小鼠的制备 | 第50-52页 |
| 5 讨论 | 第52-60页 |
| ·Mps1蛋白特异性磷酸酶的筛选和鉴定 | 第52-53页 |
| ·PPM1A条件基因敲除小鼠制作条件优化 | 第53页 |
| ·条件基因敲除的研究现状 | 第53-56页 |
| ·条件基因敲除的新策略 | 第56-57页 |
| ·基因修饰小鼠制作方法的选择 | 第57-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第68页 |