鲫鱼Mx基因的重组构建及在草鱼中的转导分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 前言 | 第10页 |
| 2 转基因的研究概况 | 第10-13页 |
| ·基因转导的方法 | 第10-11页 |
| ·转基因鱼的应用 | 第11-12页 |
| ·转基因鱼研究中存在的问题 | 第12-13页 |
| ·胚胎存活 | 第12-13页 |
| ·外源基因的整合与表达 | 第13页 |
| ·转基因鱼的安全性 | 第13页 |
| 3 Mx基因及其研究进展 | 第13-16页 |
| ·Mx的研究概况 | 第14-15页 |
| ·鱼类Mx的研究进展 | 第15-16页 |
| ·Mx与鱼类免疫 | 第16页 |
| 4 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 鲫鱼Mx基因的重组构建 | 第17-31页 |
| 1 材料与方法 | 第17-26页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·实验对象 | 第17页 |
| ·药品及试剂 | 第17页 |
| ·菌株及克隆载体 | 第17-18页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第18页 |
| ·试验用引物及序列 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·实验对象 | 第18-19页 |
| ·脾脏总RNA的提取 | 第19页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第19-20页 |
| ·鲫鱼Mx1基因开放阅读框的扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增产物的纯化回收 | 第21页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第21-22页 |
| ·序列分析 | 第22页 |
| ·Puc118-cap菌株活化 | 第22-23页 |
| ·质粒小量制备 | 第23页 |
| ·质粒酶切及酶切片段的回收纯化 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·重组载体的构建与转化 | 第24-26页 |
| ·重组载体的检验 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-29页 |
| ·RNA提取 | 第26-27页 |
| ·鲫鱼Mx1基因开放阅读框的扩增 | 第27-28页 |
| ·重组载体的构建及酶切检测 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29页 |
| 4 小结 | 第29-31页 |
| 第三章 重组基因的转导及检测分析 | 第31-42页 |
| 1 材料与方法 | 第31-38页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·实验用动物 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·仪器设备 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-38页 |
| ·质粒大量制备及线性化 | 第32页 |
| ·显微注射 | 第32页 |
| ·胚胎培养 | 第32页 |
| ·转基因草鱼基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| ·PCR检测 | 第33页 |
| ·Southern Blot | 第33-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-40页 |
| ·显微注射获得转基因草鱼群体 | 第38页 |
| ·转基因草鱼DNA提取 | 第38页 |
| ·PCR检测阳性率 | 第38-39页 |
| ·Southern杂交 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录A：英文缩写名词索引 | 第49-50页 |
| 附录B：试剂配方 | 第50-53页 |
| 附录C：相关载体结构图及其酶切位点 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
