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双酰基肼类化合物初筛选系统的建立

中文摘要第1-9页
Abstract第9-10页
1 前言第10-29页
   ·斜纹夜蛾的发生、危害及防治第10-12页
     ·斜纹夜蛾的发生与危害第10页
     ·斜纹夜蛾的综合防治第10-12页
   ·灰飞虱的发生、危害及防治第12-13页
     ·灰飞虱的发生与危害第12-13页
     ·灰飞虱的综合防治第13页
   ·双酰基肼类杀虫剂作用机制第13-18页
     ·昆虫蜕皮激素的分子机理第13-15页
     ·双酰基肼类杀虫剂毒理机制第15-17页
     ·双酰基肼类杀虫剂抗性机制第17-18页
   ·昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白研究进展第18-24页
     ·昆虫蜕皮激素受体结构和功能第18-20页
     ·超气门蛋白功能与空间结构第20-21页
     ·蜕皮激素与 EcR、USP 作用方式第21-24页
   ·研究昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白的意义第24-26页
   ·实验方法介绍第26-28页
     ·序列比对和系统进化分析第26-27页
     ·蛋白的原核表达第27-28页
   ·本研究的目的意义第28-29页
2 材料与方法第29-45页
   ·供试试剂、菌株和主要仪器第29-32页
     ·供试试剂第29页
     ·供试菌株、培养基第29-30页
     ·主要仪器第30-31页
     ·引物设计第31-32页
   ·供试虫源第32-33页
   ·总 RNA 的提取第33-35页
     ·实验预准备第33-34页
     ·Trizol 法提取总 RNA第34页
     ·RNA 质量检测第34-35页
   ·斜纹夜蛾目的基因片段克隆及表达载体构建第35-39页
     ·cDNA 第一链的合成第35页
     ·EcR、USP 目的片段克隆第35-37页
     ·重组质粒鉴定第37-38页
     ·序列分析第38页
     ·重组质粒、原核表达载体双酶切第38-39页
     ·表达载体连接、转化第39页
   ·灰飞虱 EcR cDNA 全长克隆及原核表达系统的建立第39-42页
     ·cDNA 第一链的合成第39-40页
     ·EcR 中间目的片段克隆第40页
     ·3'RACE第40-41页
     ·5'RACE第41页
     ·序列分析第41页
     ·原核表达系统构建第41-42页
   ·蛋白的表达和纯化第42-44页
     ·表达重组载体转化第42页
     ·目的基因的诱导表达第42-43页
     ·融合蛋白的纯化第43-44页
   ·不同药剂(或化合物)初筛选系统的建立第44-45页
     ·标记配基[3H]-PonA 浓度的确定第44页
     ·不同药剂(或化合物)初筛选系统的建立第44-45页
3 结果与分析第45-61页
   ·总 RNA 提取质量检测第45页
     ·紫外分光光度法检测第45页
     ·琼脂糖凝胶电泳法检测第45页
   ·斜纹夜蛾目的基因片段克隆及表达载体构建第45-53页
     ·巢式 PCR 结果检测第45-46页
     ·重组质粒 PMD18-T-EcRcde、PMD18-T-USPcdePCR 鉴定第46页
     ·EcR、USP 目的片段克隆测序结果及分析第46-52页
     ·表达重组质粒 pEHISEGFPTEV-EcRcde、pEHISEGFPTEV-USPcde鉴定第52-53页
   ·灰飞虱目的基因片段克隆及表达载体构建第53-58页
     ·编码灰飞虱 EcR 的 cDNA 全长序列及氨基酸序列第53-55页
     ·灰飞虱 EcR 基因分析第55-58页
     ·灰飞虱 EcR 原核表达载体构建第58页
   ·蛋白的表达和纯化第58-59页
   ·不同药剂(或化合物)初筛选系统的建立第59-61页
     ·标记配基[3H]-PonA 浓度的确定第59-60页
     ·不同药剂(或化合物)初筛选系统的建立第60-61页
4 讨论第61-65页
   ·RNA 提取及检测第61-62页
   ·目的基因片段克隆及表达载体构建第62-63页
   ·目的蛋白纯化第63-64页
   ·药剂(或化合物)初筛选系统的建立第64-65页
5 结论第65-66页
参考文献第66-75页
致谢第75-76页
硕士期间发表论文情况第76页

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