| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-60页 |
| 第一章 黏膜免疫系统及疫苗 | 第17-26页 |
| 1 黏膜免疫不同于系统免疫的特点 | 第17-20页 |
| ·黏膜免疫系统的组成 | 第17-18页 |
| ·黏膜免疫系统独立的结构体系 | 第18页 |
| ·黏膜免疫应答 | 第18-19页 |
| ·S-IGA功能 | 第19页 |
| ·共同黏膜免疫机制 | 第19-20页 |
| ·免疫反应 | 第20页 |
| 2 黏膜免疫系统的应用 | 第20-26页 |
| ·黏膜免疫疫苗开发现状 | 第20-24页 |
| ·呼吸道黏膜疫苗 | 第20-21页 |
| ·肠道黏膜疫苗 | 第21-24页 |
| ·生殖道黏膜疫苗 | 第24页 |
| ·寄生虫黏膜免疫疫苗 | 第24页 |
| ·黏膜免疫疫苗的接种途径 | 第24-26页 |
| 第二章 黏膜免疫抗原递呈活载体系统-NICE系统 | 第26-33页 |
| 1 黏膜免疫抗原递呈载体 | 第26页 |
| 2 乳酸菌与黏膜免疫 | 第26-27页 |
| 3 基因工程乳酸菌抗原递呈系统 | 第27-33页 |
| ·基因工程乳酸菌表达载体类型 | 第27-29页 |
| ·组成型表达载体 | 第28页 |
| ·诱导型表达载体 | 第28-29页 |
| ·乳酸菌乳链菌肽诱导表达系统 | 第29-33页 |
| ·乳酸菌NICE系统的构成 | 第29-30页 |
| ·NICE系统的优点 | 第30-31页 |
| ·NICE系统作为黏膜疫苗抗原递呈活载体的应用 | 第31页 |
| ·存在的问题及展望 | 第31-33页 |
| 第三章 黏膜免疫佐剂 | 第33-40页 |
| 1 细菌性物质 | 第33-38页 |
| ·细菌毒素 | 第33-35页 |
| ·CT和LT作为黏膜佐剂的应用 | 第34-35页 |
| ·CPG ODN序列 | 第35-38页 |
| ·CpG ODN作用机理 | 第35-36页 |
| ·CpG ODN佐剂的应用现状 | 第36-38页 |
| 2 细胞因子 | 第38-39页 |
| 3 抗原传递系统 | 第39-40页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第40-58页 |
| 1 病原学特征 | 第40-51页 |
| ·分类地位及生物学特性 | 第40-42页 |
| ·病毒血凝性 | 第42页 |
| ·PRRSV基因组成及其编码的蛋白功能 | 第42-51页 |
| ·非编码区(5'NCR、3’NCR)和复制酶基因(ORFla、ORFlb) | 第42-43页 |
| ·结构蛋白基因及其编码的蛋白质 | 第43-51页 |
| ·非主要结构蛋白 | 第43-45页 |
| ·主要结构蛋白 | 第45-51页 |
| 2 PRRSV的危害 | 第51-56页 |
| ·抗体依赖性增强作用 | 第51-55页 |
| ·ADE作用的机制 | 第52-54页 |
| ·PRRSV的ADE的危害 | 第54-55页 |
| ·病毒的持续性感染和继发感染 | 第55页 |
| ·病毒的高度变异性 | 第55-56页 |
| 3 PRRSV的免疫 | 第56-58页 |
| ·商品化疫苗的局限性 | 第56页 |
| ·PRRSV免疫策略 | 第56-58页 |
| 第五章 研究的目的及意义 | 第58-60页 |
| 第二篇 研究部分 | 第60-101页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF6基因表达载体的构建 | 第60-82页 |
| 1 试验材料 | 第60-63页 |
| ·病毒、细胞 | 第60页 |
| ·载体及菌株 | 第60-61页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第61页 |
| ·主要溶液配制 | 第61-63页 |
| ·病毒培养液 | 第61-62页 |
| ·细菌培养基 | 第62页 |
| ·感受态细胞制备及转化所用溶液 | 第62页 |
| ·诱导剂Nisin处理 | 第62-63页 |
| ·主要仪器设备 | 第63页 |
| 2 试验方法 | 第63-73页 |
| ·PRRSV ORF6基因提取纯化 | 第63-65页 |
| ·引物设计合成 | 第63页 |
| ·病毒扩增及总RNA提取 | 第63-64页 |
| ·cDNA的合成 | 第64页 |
| ·ORF6基因的扩增 | 第64-65页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第65页 |
| ·靶基因的纯化回收 | 第65页 |
| ·克隆载体PMD19-T-M的构建 | 第65-67页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备 | 第65页 |
| ·连接转化 | 第65-66页 |
| ·质粒提取及鉴定 | 第66-67页 |
| ·测序 | 第67页 |
| ·表达PRRSV ORF6基因菌体的构建 | 第67-71页 |
| ·表达PRRSV ORF6基因大肠杆菌的构建 | 第67-69页 |
| ·表达PRRSV ORF6基因乳酸乳球菌的构建 | 第69-71页 |
| ·基因工程重组菌的诱导表达 | 第71-73页 |
| ·pET32a-M/PRRSV诱导表达及蛋白含量测定 | 第71-72页 |
| ·PNZ8149/NZ3900-M/PRRS诱导表达 | 第72-73页 |
| ·免疫活性检测 | 第73页 |
| ·PNZ8149/NZ3900-M/PRRS诱导后产物间接免疫荧光分析 | 第73页 |
| 3 结果分析 | 第73-79页 |
| ·克隆载体PMD19T-M/PRRSV的构建 | 第73-74页 |
| ·PMD19-M/PRRSV的鉴定 | 第73页 |
| ·PMD19-M/PRRSV中ORF6基因测序鉴定 | 第73-74页 |
| ·大肠杆菌表达系统的构建 | 第74-76页 |
| ·pET32a-M/PRRSV的鉴定 | 第74-75页 |
| ·M蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第75页 |
| ·M蛋白的纯化及含量测定 | 第75-76页 |
| ·乳酸乳球菌表达系统的构建 | 第76-79页 |
| ·重组质粒PNZ8149/NZ3900-M/PRRS的鉴定 | 第76-77页 |
| ·M蛋白在乳酸乳球菌中的诱导表达 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| ·PRRSV M蛋白的表达 | 第79-80页 |
| ·乳链菌肽诱导表达(NICE)系统的选择 | 第80-81页 |
| 5 小结 | 第81-82页 |
| 第二章 重组乳酸乳球菌PNZ8149/NZ3900-M/PRRS免疫原性检测 | 第82-101页 |
| 1 试验材料 | 第82-83页 |
| ·试验动物 | 第82页 |
| ·免疫原 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82-83页 |
| ·主要溶液配制 | 第83页 |
| ·主要仪器设备 | 第83页 |
| 2 试验方法 | 第83-87页 |
| ·试验动物选择及处理 | 第83-84页 |
| ·免疫用试验材料的制备 | 第84页 |
| ·免疫原制备 | 第84页 |
| ·PNZ8149/NZ3900空载体菌液制备 | 第84页 |
| ·样品采集及指标检测方法 | 第84-87页 |
| ·免疫鼠黏膜中s-IgA检测 | 第84-85页 |
| ·免疫鼠血清中特异抗体IgG检测 | 第85页 |
| ·细胞因子(Cytokines)检测 | 第85-87页 |
| 3 结果与分析 | 第87-94页 |
| ·血清特异性抗体IGG | 第87-89页 |
| ·黏膜抗体s-IGA | 第89-92页 |
| ·肠黏膜s-IgA | 第89页 |
| ·呼吸道黏膜s-IgA | 第89-92页 |
| ·细胞因子 | 第92-94页 |
| ·细胞免疫评价因子IL-2、IL-4及IFN-γ | 第92页 |
| ·黏膜淋巴因子IL-5 | 第92页 |
| ·黏膜免疫耐受因子IL-10 | 第92-94页 |
| 4 讨论 | 第94-99页 |
| ·重组菌PNZ8149/NZ3900-M/PRRS诱导的免疫反应 | 第94-96页 |
| ·黏膜免疫应答 | 第94-95页 |
| ·系统免疫应答 | 第95-96页 |
| ·黏膜免疫耐受 | 第96页 |
| ·黏膜免疫接种途径 | 第96-98页 |
| ·PRRSV感染的预防机制 | 第98-99页 |
| 5 小结 | 第99-101页 |
| 第三章 CPG ODN联合重组乳酸乳球菌鼻内免疫BALB/C小鼠的佐剂效应 | 第101-111页 |
| 1 试验材料 | 第101-102页 |
| ·试验动物 | 第101页 |
| ·佐剂及免疫原 | 第101页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第101-102页 |
| 2 试验方法 | 第102页 |
| ·试验动物的选取及处理 | 第102页 |
| ·免疫用试验材料的制备 | 第102页 |
| ·样品采集及指标检测方法 | 第102页 |
| 3 结果与分析 | 第102-108页 |
| ·血清IGG抗体 | 第102-103页 |
| ·肠黏膜S-IGA | 第103页 |
| ·呼吸道黏膜S-IGA | 第103-107页 |
| ·细胞因子 | 第107-108页 |
| 4 讨论 | 第108-109页 |
| 5 小结 | 第109-111页 |
| 第三篇 结论及创新点 | 第111-113页 |
| 1 结论 | 第111页 |
| 2 创新点 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-126页 |
| 作者简介 | 第126页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
