高纯度Taq DNA聚合酶制备技术研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-19页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)简史 | 第11-13页 |
| ·PCR反应的建立及初步应用 | 第11-12页 |
| ·PCR技术的应用进展 | 第12页 |
| ·常用的PCR技术 | 第12-13页 |
| ·目前常用的几种DNA聚合酶 | 第13-14页 |
| ·Taq DNA聚合酶简介 | 第14-17页 |
| ·Taq DNA聚合酶的发现 | 第14页 |
| ·Taq DNA聚合酶的结构 | 第14-16页 |
| ·Taq DNA聚合酶的特点 | 第16-17页 |
| ·索拉胶的简介及应用 | 第17-18页 |
| ·Salecan的来源及性能 | 第17-18页 |
| ·已发现的Salecan的功能 | 第18页 |
| ·课题的研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 重组大肠杆菌的构建及Taq酶的表达 | 第19-39页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·实验试剂及所用培养基配方 | 第19-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·本章所用引物 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-32页 |
| ·Taq DNA聚合酶工程菌的构建 | 第22-24页 |
| ·重组Taq DNA聚合酶的表达 | 第24-27页 |
| ·重组Taq DNA聚合酶的初步纯化 | 第27页 |
| ·常用的蛋白质与核酸的研究方法 | 第27-32页 |
| ·实验结果与讨论 | 第32-38页 |
| ·重组菌的构建 | 第32-33页 |
| ·生长曲线的测定 | 第33页 |
| ·硫酸铵使用浓度的确定 | 第33-34页 |
| ·诱导剂的使用 | 第34-38页 |
| ·初步纯化的Taq酶的酶活 | 第38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 3 Taq酶中DNA的污染及酶的纯化 | 第39-53页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·实验试剂及制备 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| ·本章所用引物 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·Taq酶的DNA污染 | 第40页 |
| ·PEG-Na2_SO_4法纯化Taq酶 | 第40-41页 |
| ·PEI法去除酶中的DNA | 第41-42页 |
| ·Ni柱纯化Taq酶 | 第42-43页 |
| ·Salecan-Na_2SO_4法纯化Taq酶 | 第43页 |
| ·其他纯化方法 | 第43-44页 |
| ·Taq DNA聚合酶活力与比活力的测定 | 第44页 |
| ·实验结果与讨论 | 第44-52页 |
| ·Taq酶中DNA污染 | 第44-45页 |
| ·PEG-Na_2SO_4法纯化Taq酶 | 第45-47页 |
| ·PEI法纯化Taq酶 | 第47-49页 |
| ·Ni柱纯化Taq酶 | 第49-50页 |
| ·Salecan-Na_2SO_4法纯化Taq酶 | 第50-52页 |
| ·酶的活力与比活力 | 第52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 4 酶抗体的应用实现热启动PCR | 第53-68页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·实验试剂 | 第53-54页 |
| ·实验器材 | 第54页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·本章所用引物 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-63页 |
| ·抗体及其制备的原理和方法 | 第55-56页 |
| ·Taq酶抗体的制备 | 第56页 |
| ·Salecan在抗体制备中的应用 | 第56-58页 |
| ·抗体的检测分析方法 | 第58-62页 |
| ·热启动Taq酶的制备 | 第62-63页 |
| ·热启动Taq酶的性能验证 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-67页 |
| ·Taq酶抗体在制备过程中的检测及分析 | 第63-65页 |
| ·最终所得抗血清的琼扩效价 | 第65-66页 |
| ·Western Blot验证抗体的特异性 | 第66页 |
| ·热启动Taq酶 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 5 结论与展望 | 第68-70页 |
| ·Taq酶的特性分析 | 第68页 |
| ·本论文的创新点 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录Ⅰ | 第79-80页 |
| 附录Ⅱ | 第80页 |
