| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| ·L-缬氨酸研究背景 | 第9页 |
| ·L-缬氨酸理化性质 | 第9-10页 |
| ·L-缬氨酸的应用 | 第10页 |
| ·L-缬氨酸的生产状况 | 第10页 |
| ·L-缬氨酸的生物合成途径 | 第10-11页 |
| ·发酵法生产 L-缬氨酸的研究进展 | 第11-13页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶以及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 | 第12-13页 |
| ·立题意义以及研究内容 | 第13-15页 |
| ·立题意义 | 第13页 |
| ·研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 L-缬氨酸生产菌株 V1 的鉴定及发酵培养基确定 | 第15-27页 |
| ·材料与方法 | 第15-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·主要培养基及培养条件 | 第15-16页 |
| ·主要培养基 | 第15-16页 |
| ·菌株培养条件 | 第16页 |
| ·主要工具酶 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-20页 |
| ·生理生化性质研究 | 第16-17页 |
| ·分子鉴定实验方法 | 第17-19页 |
| ·L-缬氨酸的定量测定 | 第19-20页 |
| ·结果与讨论 | 第20-25页 |
| ·细菌 V1 的菌落表型 | 第20页 |
| ·细菌 V1 的生理生化特征 | 第20-21页 |
| ·细菌 V116S rDNA 基因的获得 | 第21页 |
| ·PCR 产物的克隆以及序列测定 | 第21页 |
| ·细菌 V1 的种属确定 | 第21-22页 |
| ·细菌 V1 的种子生长曲线 | 第22页 |
| ·细菌 V1 发酵条件的优化 | 第22-25页 |
| ·本章小结 | 第25-27页 |
| 第三章 基因 PEPC 对谷氨酸棒杆菌 V1 积累 L-缬氨酸的影响 | 第27-43页 |
| ·实验材料与方法 | 第27-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·培养基和培养条件 | 第27页 |
| ·工具酶 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·常用化学试剂 | 第27页 |
| ·抗生素 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·实验结果与讨论 | 第33-40页 |
| ·部分片段缺失的基因Δpepc 的获得 | 第33页 |
| ·构建重组质粒 pK18mobsacB-Δpepc | 第33-34页 |
| ·基因敲除的 PCR 验证 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的测序验证 | 第35页 |
| ·敲除菌株的发酵特性研究 | 第35页 |
| ·测定磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、丙酮酸羧化酶和丙酮酸激酶 | 第35-37页 |
| ·基因 pepc 的获得 | 第37页 |
| ·重组质粒 pJC1-tac-pepc 的构建 | 第37-38页 |
| ·重组菌株 V1(pJC1-tac-pepc)酶活测定 | 第38页 |
| ·重组菌株的发酵特性研究 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-43页 |
| 第四章 基因 PCK 对谷氨酸棒杆菌 V1 积累 L-缬氨酸的影响 | 第43-49页 |
| ·材料与方法 | 第43-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·培养基和培养条件 | 第43页 |
| ·工具酶、主要试剂、仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·细菌 V1 基因组的提取 | 第43页 |
| ·目的基因 pck 的克隆 | 第43-44页 |
| ·目的基因 pck 的 PCR 产物与质粒 pMD19-T 片段的连接 | 第44页 |
| ·JM109 大肠杆菌感受态细胞的制备及 CaCl2法转化 | 第44页 |
| ·重组质粒的提取 | 第44页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第44页 |
| ·目的基因的胶回收 | 第44页 |
| ·PCK 酶活测定 | 第44-45页 |
| ·实验结果与讨论 | 第45-47页 |
| ·重组质粒 pJC1-tac-pck 的构建 | 第45页 |
| ·重组菌株 V1(pJC1-tac-pck)酶活测定 | 第45-46页 |
| ·重组菌株 V1(pJC1-tac-pck)的发酵特性研究 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第五章 结论和展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57-58页 |
| 附录 2：核苷酸序列 | 第58-61页 |
| 细菌 V1 的 16S rDNA 的核苷酸序列 | 第58页 |
| 细菌 V1 的 pck 核苷酸序列 | 第58-59页 |
| 细菌 V1 的 pepc 核苷酸序列 | 第59-60页 |
| 细菌 V1 的Δpepc 核苷酸序列 | 第60-61页 |
