| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1 复合益生菌研究概况 | 第11-12页 |
| 2 肠道微生物体外模型研究进展 | 第12-16页 |
| ·静止发酵或罐批量培养模型 | 第13页 |
| ·连续发酵培养系统 | 第13-15页 |
| ·人类肠道微生态模拟器 | 第15-16页 |
| ·电脑控制发酵系统 | 第16页 |
| ·肠道微生物生态的非流动性发酵系统 | 第16页 |
| 3 体外肠道模型的应用 | 第16-18页 |
| ·肠道微生态内细菌功能和多样性的研究 | 第16-17页 |
| ·体外模拟肠道抗生素对肠道菌群变化的药效研究 | 第17页 |
| ·微生态制剂和益生素生产研究 | 第17-18页 |
| 4 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 模拟肠道微生物发酵模型的优化和评估 | 第19-43页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-33页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·淀粉总量检测(淀粉葡糖苷酶/α-淀粉酶方法) | 第21-24页 |
| ·原理 | 第21-22页 |
| ·测定含有D-葡萄糖和/或麦芽糊精的样品中淀粉含量步骤 | 第22-24页 |
| ·粪、回、盲肠含氮量的测定 | 第24-28页 |
| ·凯氏定氮法原理 | 第24-25页 |
| ·方法和步骤 | 第25-28页 |
| ·DGGE实验原理 | 第28-29页 |
| ·DGGE胶的制作 | 第29-31页 |
| ·配制0%和100%变性液 | 第29-30页 |
| ·上层胶配制 | 第30-31页 |
| ·点样 | 第31页 |
| ·电泳(温度控制在60℃) | 第31页 |
| ·染色 | 第31页 |
| ·DNA提取方法 | 第31-32页 |
| ·PCR体系 | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·挑克隆进行测序 | 第33页 |
| 3 实验结果及讨论 | 第33-34页 |
| 4 稳定性评估 | 第34-35页 |
| 5. 碳源的作用评估 | 第35-41页 |
| ·培养基配方 | 第35-37页 |
| ·实验结果 | 第37页 |
| ·测序结果 | 第37-41页 |
| 6 利用选择性培养基培养发酵罐中的样品发现乳糖培养基和乳清培养基显著地抑制沙门氏菌和变形杆菌的生长 | 第41页 |
| 7 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 种子罐的建立 | 第43-49页 |
| 前言 | 第43页 |
| 1 抗性初步分析 | 第43-44页 |
| ·生态猪的挑选标准 | 第43-44页 |
| 2 接种 | 第44-46页 |
| ·整个发酵系统的灭菌 | 第44-45页 |
| ·培养基配置和模型的组装 | 第45页 |
| ·取样接种 | 第45-46页 |
| 3 cfu和菌种鉴定 | 第46-47页 |
| 4 生化鉴定 | 第47页 |
| 5 冷冻干燥后乳酸菌计数 | 第47页 |
| 6 药敏片法检测耐药性 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48页 |
| 7 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 动物试验 | 第49-69页 |
| 前言 | 第49页 |
| 1 小鼠动物安全实验 | 第49页 |
| 2 饲喂仔猪第一次实验 | 第49-52页 |
| ·动物饲喂试验方法 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50页 |
| ·16SrDNA V3区扩增 | 第50-51页 |
| ·荧光定量PCR检测特定菌群数目 | 第51-52页 |
| ·荧光定量PCR原理 | 第51页 |
| ·标准品的制定 | 第51-52页 |
| ·标准曲线绘制 | 第52页 |
| 3 DGGE实验结果 | 第52-56页 |
| ·实验组 | 第52-54页 |
| ·对照组DGGE分析 | 第54-56页 |
| 4 第二批饲喂小猪 | 第56-63页 |
| ·对照组A组 | 第56-58页 |
| ·对照组B组 | 第58-59页 |
| ·实验C组 | 第59-60页 |
| ·实验D组 | 第60-61页 |
| ·实验E组 | 第61-63页 |
| 5 荧光定量PCR结果 | 第63-67页 |
| ·菌群数量变化曲线 | 第63-64页 |
| ·菌群比例变化图 | 第64-67页 |
| 6. 饲喂微生态调控剂对仔猪腹泻发生率和生长状况的影响 | 第67-68页 |
| 7 讨论 | 第68-69页 |
| 第五章 讨论与总结 | 第69-73页 |
| 1 高通量测序技术应用于体外肠道模型研究 | 第69页 |
| 2 利用体外肠道模型进行微生物的分离和克隆新的功能基因 | 第69-70页 |
| 3 猪肠道复合益生菌的应用分析 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 附录一 Real-time PCR扩增曲线图,融解曲线图,标准曲线图 | 第78-82页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
