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对虾白斑综合症病毒性质和蛋白激酶wsv083的研究

摘要第1-10页
Abstract第10-12页
第一章 前言第12-39页
 一、 对虾白斑综合症病毒的发现及其命名第12-14页
 二、 对虾白斑综合症病毒的大小和形态结构第14-15页
 三、 WSSV 的主要宿主和主要的替代感染动物模型第15-17页
 四、 WSSV 可能的侵染过程及其易感组织第17-19页
 五、 WSSV 的分离纯化方法和检测技术第19-21页
 六、 WSSV 的基因组学研究第21-27页
 七、 WSSV 的蛋白质组学研究第27-37页
   ·WSSV 的主要结构蛋白第27-35页
   ·对虾白斑综合症病毒的非结构蛋白第35-37页
 八、本研究的选题依据及意义第37-39页
第二章 对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus)的一些基本性质的研究第39-54页
 一、 材料与方法第39-43页
   ·材料第39-40页
   ·方法第40-43页
     ·病毒的感染和增殖第40页
     ·完整病毒的纯化第40-41页
     ·病毒膜蛋白和核衣壳蛋白的制备第41页
     ·电镜观察 WSSV 粒子以及核衣壳第41页
     ·WSSV 中膜蛋白和核衣壳比例的研究第41-42页
     ·WSSV 基因组 DNA 的提取第42页
     ·WSSV 基因组 DNA 占其干重的比例研究第42-43页
     ·病毒溶液的 OD600与其浓度的换算关系研究第43页
     ·完整 WSSV 粒子和核衣壳不同比例下 OD 值的变化第43页
 二、 计算过程和结果第43-49页
   ·基因组 DNA 占 WSSV 干重的比例及 WSSV 干重第43-44页
   ·病毒溶液的 OD600与其浓度的换算关系第44-45页
   ·WSSV 中膜和核衣壳所占的比例第45-46页
   ·膜蛋白中四种主要膜蛋白(VP28、VP26、VP24、VP19)的含量比例第46-47页
   ·四种主要膜蛋白(VP28、VP26、VP24、VP19)的相对比例第47-48页
   ·提取的 WSSV 和核衣壳的电子显微镜照片第48页
   ·一个 WSSV 病毒粒子中四种主要膜蛋白的数量第48-49页
   ·WSSV 粒子和核衣壳比例的变化对 OD 值的影响第49页
 三、 讨论第49-54页
第三章 细菌在克氏原螯虾感染 WSSV 后死亡过程中的作用第54-74页
 1、前言第54-57页
 2.材料与方法第57-60页
   ·材料第57-58页
   ·方法第58-60页
     ·16SrDNA PCR 产物的克隆和测序及种属的鉴定第58页
     ·WSSV 的感染和纯化第58页
     ·注射双抗第58页
     ·虾血淋巴中 DNA 提取方法第58-59页
     ·实时荧光定量 PCR第59页
     ·螯虾血细胞的抽取与观察第59页
     ·虾血淋巴中菌落种群变化的检测第59-60页
 3.结果与分析第60-70页
   ·螯虾在注射 WSSV 后不同阶段血细胞观察第60-61页
   ·感染 WSSV 后螯虾血细胞数量变化第61-62页
   ·感染 WSSV 的螯虾注射抗生素对其死亡率的影响第62-64页
   ·抗生素对于螯虾体内 WSSV 增殖的影响第64页
   ·感染 WSSV 后的螯虾体内细菌种群及其数量变化研究第64-66页
   ·细菌的 16SrDNA 扩增结果第66-70页
 4.讨论第70-74页
第四章 对虾白斑综合症病毒(WSSV)囊膜表面蛋白的研究第74-81页
 一、 材料与方法第75-77页
   ·材料第75页
   ·方法第75-77页
     ·WSSV 病毒粒子的感染和提取第75页
     ·凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白组分的提取第75-76页
     ·Sulfo-SBED 生物素标记程序第76页
     ·生物素标记转移和检测第76-77页
 二、 结果和分析第77-79页
 三、 讨论第79-81页
第五章 WSSV 的 wsv083 基因的研究第81-94页
 一、 材料与方法第82-85页
   ·材料第82页
   ·方法第82-85页
     ·共转化程序第82页
     ·虾腹足肌肉中 DNA 提取程序第82-83页
     ·螯虾血淋巴 DNA 提取程序第83页
     ·CIAP 对 wsv083 蛋白进行去除磷酸化处理第83-84页
     ·激酶活性研究第84页
     ·Sulfo-SBED 生物素标记程序第84页
     ·生物素标记转移和检测第84-85页
 二、 结果第85-91页
   ·wsv083 的扩增和重组质粒的双酶切鉴定第85-86页
   ·wsv083 基因的表达与 Western blotting 检测第86-87页
   ·wsv083 的激酶活性研究第87-91页
 三、 讨论第91-94页
第六章 本研究的主要结论、创新点及研究展望第94-97页
 1、主要结论第94-95页
 2、本研究的主要创新点第95页
 3、进一步研究展望第95-97页
参考文献第97-110页
附录第110-125页
 1、缩略词第110-111页
 2、常用溶液及培养基的配制第111-115页
 3、常规实验方法第115-119页
 4、细菌的 16SrDNA 测序结果第119-122页
 5、主要仪器设备第122-125页
致谢第125页

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