敲除花时基因C220对烟草生长发育的影响
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 国内外研究现状及分析 | 第10-14页 |
| 2 RNA干扰技术的发展和在植物中的应用 | 第14-16页 |
| ·RNA干扰技术的发展 | 第14-15页 |
| ·RNA干扰技术的作用机制 | 第15-16页 |
| 3 转录后基因沉默技术在植物中的应用 | 第16-17页 |
| 4 RNAi技术优势和存在的问题 | 第17-19页 |
| 材料和方法 | 第19-31页 |
| 1 材料 | 第19页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·酶和生化试剂 | 第19页 |
| ·抗生素和生长激素(见附录Ⅱ) | 第19页 |
| ·培养基的配制(见附录Ⅲ) | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-31页 |
| ·烟草无菌苗的准备 | 第19-20页 |
| ·RNAi目标区段选择及引物设计 | 第20页 |
| ·总RNA的提取及RT-PCR | 第20-21页 |
| ·利用Gateway技术构建RNAi载体 | 第21-23页 |
| ·遗传转化烟草 | 第23-25页 |
| ·农杆菌细胞转化(三亲交配法) | 第23-24页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第24页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第24页 |
| ·烟草的移栽 | 第24-25页 |
| ·转基因烟草的DNA检测 | 第25-26页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第26-29页 |
| ·转基因烟草总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR检测基因在转基因烟草中的转录 | 第27-29页 |
| ·转基因烟草叶绿素测定 | 第29-30页 |
| ·转基因植株表型鉴定 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-38页 |
| 1 BP反应及阳性克隆检测 | 第31页 |
| 2 LR反应及阳性克隆检测 | 第31-32页 |
| 3 叶盘法转化烟草外植体 | 第32-33页 |
| 4 转基因烟草的DNA检测 | 第33-34页 |
| ·转基因烟草的基因组DNA提取结果 | 第33-34页 |
| ·基因组DNA的纯度及浓度 | 第34页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第34页 |
| 5 转基因烟草RNA检测 | 第34-36页 |
| ·电泳检测提取RNA的完整性 | 第34-35页 |
| ·转基因烟草总RNA纯度及浓度检测 | 第35页 |
| ·转基因烟草RT-PCR检测结果 | 第35-36页 |
| 6 转基因烟草叶绿素的测定结果 | 第36页 |
| 7 表型鉴定 | 第36-38页 |
| 讨论 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 附录Ⅰ 化学药品的配制 | 第46-47页 |
| 附录Ⅱ 抗生素和生长素的工作液浓度 | 第47页 |
| 附录Ⅲ 培养基的配制 | 第47-49页 |
| 附录Ⅳ 缩写符号说明 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
