| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第9页 |
| 2 主要研究内容 | 第9页 |
| 3 研究技术路线 | 第9-11页 |
| 第一章 论文综述 | 第11-24页 |
| ·禽流感病毒研究进展 | 第11-15页 |
| ·禽流感病毒的形态和化学成分 | 第11页 |
| ·禽流感病毒的分子结构与分类 | 第11-13页 |
| ·禽流感病毒的复制与致病机理 | 第13-14页 |
| ·存在问题与展望 | 第14-15页 |
| ·NS1蛋白的结构 | 第15-17页 |
| ·N-末端RNA结合区的结构 | 第15-16页 |
| ·C-末端效应区的结构 | 第16-17页 |
| ·NS1蛋白的功能 | 第17-20页 |
| ·抑制和利用宿主细胞的转录翻译系统 | 第17-18页 |
| ·拮抗干扰素的抗病毒作用 | 第18-19页 |
| ·NS1蛋白下调细胞凋亡 | 第19-20页 |
| ·NS1蛋白与其他宿主蛋白相互作用 | 第20页 |
| ·NS1蛋白和importina/β相互作用 | 第20页 |
| ·NS1蛋白和nucleolin相互作用 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第20-24页 |
| ·酵母双杂交系统的作用原理 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交系统选用酵母作为报告株的优点 | 第21-22页 |
| ·酵母双杂交系统相对其他方法具有的优点 | 第22页 |
| ·酵母双杂交系统中常见的问题 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-36页 |
| ·材料 | 第24-29页 |
| ·菌株及细胞系 | 第24页 |
| ·质粒载体 | 第24-25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·酶类、分子量标准与试剂盒 | 第25页 |
| ·主要化学试剂及常规溶液的配制 | 第25-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的回收(DNA片段凝胶回收试剂盒) | 第30页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第30-31页 |
| ·酶切DNA片段与酶切载体的连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备(RbCI法) | 第31页 |
| ·RbC1感受态细胞的转化 | 第31页 |
| ·质粒快速抽提(质粒小量纯化试剂盒) | 第31-32页 |
| ·酵母感受态的制备与转化 | 第32页 |
| ·酵母蛋白的提取 | 第32-33页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第33页 |
| ·酵母转化子β-半乳糖苷酶的固体测活 | 第33-34页 |
| ·细胞培养及转染 | 第34页 |
| ·Western Blotting | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的原核表达与纯化 | 第35页 |
| ·GST Pull Down分析 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果 | 第36-42页 |
| ·pGBKT7-NS1重组质粒的构建 | 第36页 |
| ·PCR扩增禽流感病毒NS1基因 | 第36页 |
| ·pGBKT7-NS1酵母表达载体的构建 | 第36页 |
| ·酵母双杂交系统筛选与NS1相互作用的宿主蛋白 | 第36-40页 |
| ·pGBKT7-NS1在酵母AH109中蛋白表达的检测 | 第36-37页 |
| ·pGBKT7-NS1自激活活性的检测 | 第37页 |
| ·cDNA文库转化酵母AH109 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第38页 |
| ·提取酵母质粒进行PCR扩增并转化大肠杆菌 | 第38页 |
| ·测序结果与分析 | 第38页 |
| ·回交验证 | 第38-40页 |
| ·GST Pull-down验证NS1蛋白与文库蛋白的相互作用 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增文库蛋白基因 | 第40页 |
| ·pGEX4T1-U原核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·U蛋白在原核细胞中的表达 | 第40页 |
| ·GST Pull-down实验 | 第40-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-44页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第42-43页 |
| ·蛋白相互作用的鉴定 | 第43页 |
| ·NS1蛋白功能提示 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 硕士期间发表文章 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 附录 | 第49页 |