| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略词 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| ·马铃薯概述 | 第17-18页 |
| ·马铃薯块茎低温糖化机理及抗低温糖化改良 | 第18-21页 |
| ·植物细胞低温糖化的普遍性 | 第18-19页 |
| ·马铃薯块茎低温糖化的生物化学机制 | 第19页 |
| ·马铃薯抗低温糖化育种可能的突破点 | 第19-21页 |
| ·低温胁迫与植物低温抗性研究进展 | 第21-29页 |
| ·低温胁迫下植物细胞生理的变化 | 第21-22页 |
| ·植物细胞应对低温胁迫的渗透调节 | 第22-23页 |
| ·低温诱导表达基因研究 | 第23-29页 |
| ·低温诱导基因的分离鉴定 | 第23-24页 |
| ·COR基因的功能 | 第24-25页 |
| ·COR基因的调控 | 第25-29页 |
| ·植物启动子研究 | 第29-41页 |
| ·植物启动子的基本结构及其功能 | 第29-32页 |
| ·TATA盒 | 第30页 |
| ·超始因子 | 第30-31页 |
| ·CAAT-box | 第31页 |
| ·G-box | 第31-32页 |
| ·启动子的类型 | 第32-34页 |
| ·组成型启动子 | 第32页 |
| ·诱导型启动子 | 第32-33页 |
| ·组织特异型启动子 | 第33-34页 |
| ·真核生物融合启动子研究进展 | 第34-41页 |
| ·融合启动子的类型 | 第35-39页 |
| ·影响融合启动子活性的因素 | 第39-41页 |
| ·融合启动子研究的意义与展望 | 第41页 |
| ·本研究的目的,意义和主要内容 | 第41-43页 |
| 第二章 材料与方法 | 第43-59页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌种和质粒 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-59页 |
| ·质粒的小量提取 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第45页 |
| ·农杆菌介导的植物遗传转化 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导的马铃薯试管薯的遗传转化 | 第46页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第46-48页 |
| ·叶片DNA小量抽提(用于PCR) | 第46-47页 |
| ·植物DNA的大量抽提与纯化(用于Southern杂交) | 第47-48页 |
| ·马铃薯叶片RNA的提取 | 第48页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第48-49页 |
| ·转基因植株的Southern杂交 | 第49-51页 |
| ·总DNA的预酶切和酶切 | 第49页 |
| ·电泳转膜 | 第49-50页 |
| ·预杂交 | 第50页 |
| ·探针标记 | 第50-51页 |
| ·杂交 | 第51页 |
| ·洗膜与放射性自显影 | 第51页 |
| ·GUS活性测定 | 第51-54页 |
| ·植物组织的GUS染色 | 第51-52页 |
| ·GUS活性的荧光定量测定 | 第52-54页 |
| ·蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第54-56页 |
| ·基本原理 | 第54页 |
| ·器材 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54-55页 |
| ·操作步骤 | 第55-56页 |
| ·凝胶电泳迁移率实验(EMSA) | 第56-59页 |
| ·基本原理 | 第56-57页 |
| ·试剂的配制 | 第57页 |
| ·凝胶电泳迁移率实验方法 | 第57-59页 |
| 第三章 cor15α基因启动子与ci21A基因启动子低温诱导活性的比较研究 | 第59-74页 |
| ·前言 | 第59页 |
| ·材料与方法 | 第59-63页 |
| ·植物材料 | 第59-60页 |
| ·菌种和质粒 | 第60页 |
| ·酶和试剂 | 第60页 |
| ·常规DNA操作 | 第60页 |
| ·cor15α基因启动子片段的PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·ci21A基因启动子的PCR扩增 | 第61页 |
| ·表达载体pLB和pCI21A的构建 | 第61-62页 |
| ·烟草的遗传转化及植株再生 | 第62页 |
| ·烟草转化植株的PCR检测和Southern杂交鉴定 | 第62页 |
| ·转基因烟草的低温处理和GUS组织化学染色 | 第62-63页 |
| ·GUS活性的荧光定量测定 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-72页 |
| ·cor15α基因启动子的PCR扩增及启动子序列 | 第63-64页 |
| ·ci21A基因启动子的PCR扩增及启动子序列 | 第64-66页 |
| ·遗传转化载体pLB的构建 | 第66页 |
| ·遗传转化载体pCI21A的构建 | 第66-67页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第67-68页 |
| ·转基因烟草植株的PCR和Southern杂交鉴定 | 第68-70页 |
| ·cor15α基因启动子与ci21A基因启动子在烟草中的表达特点 | 第70页 |
| ·cor15a基因启动子与ci21A基因启动子在烟草中的低温诱导活性 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 拟南芥低温诱导cor15α基因启动子在马铃薯中的功能 | 第74-81页 |
| ·前言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·植物材料 | 第74页 |
| ·菌种和质粒 | 第74页 |
| ·马铃薯的遗传转化及植株再生 | 第74-75页 |
| ·马铃薯转化植株的PCR和Southern杂交鉴定 | 第75页 |
| ·转基因马铃薯的低温处理及GUS组织化学染色 | 第75页 |
| ·GUS荧光定量测定 | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-79页 |
| ·马铃薯转化植株的获得 | 第76-77页 |
| ·转基因植株的PCR和Southern杂交鉴定 | 第77-78页 |
| ·cor15α基因启动子在转基因马铃薯叶片中的低温诱导表达 | 第78页 |
| ·cor15α基因启动子在转基因马铃薯不同组织中的GUS活性检测 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 块茎特异和低温诱导融合启动子的构建及在马铃薯中的功能 | 第81-97页 |
| ·前言 | 第81-82页 |
| ·材料与方法 | 第82-86页 |
| ·植物材料,菌株和培养基 | 第82页 |
| ·融合启动子pCL和pLC的构建 | 第82-84页 |
| ·马铃薯转化载体的构建 | 第84页 |
| ·马铃薯的遗传转化 | 第84-85页 |
| ·转基因植株的PCR筛选和Southern杂交分析 | 第85-86页 |
| ·转基因马铃薯的低温处理和GUS酶活性荧光分析 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-95页 |
| ·融合启动子pCL和pLC的构建 | 第86-89页 |
| ·马铃薯转化载体的构建 | 第89页 |
| ·马铃薯的遗传转化及转化植株的获得 | 第89-90页 |
| ·转化植株的PCR筛选和Southern杂交鉴定 | 第90-92页 |
| ·融合启动子在马铃薯中的表达活性和低温诱导性 | 第92-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| 第六章 马铃薯CBF/DREB类转录因子基因的克隆,原核表达及其与LTRE的结合功能研究 | 第97-117页 |
| ·前言 | 第97-98页 |
| ·材料与方法 | 第98-102页 |
| ·植物材料与低温处理 | 第98页 |
| ·菌种和质粒 | 第98-99页 |
| ·马铃薯叶片总RNA的抽提及cDNA第一链的合成 | 第99页 |
| ·马铃薯CBF/DREB基因蛋白质编码区的PCR扩增 | 第99-100页 |
| ·蛋白质编码区的序列分析及同源基因的比较 | 第100页 |
| ·GST融合蛋白表达载体的构建 | 第100页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及检测 | 第100页 |
| ·可溶性GST融合蛋白的提取和纯化 | 第100-101页 |
| ·融合蛋白与启动子调控序列之间的互作研究 | 第101-102页 |
| ·CBF/DREB基因的拷贝数分析 | 第102页 |
| ·CBF/DREB基因表达模式分析 | 第102页 |
| ·结果与分析 | 第102-114页 |
| ·马铃薯CBF/DREB基因的PCR扩增 | 第102-104页 |
| ·基因的序列分析 | 第104-108页 |
| ·GST融合蛋白表达载体的构建 | 第108-109页 |
| ·GST融合蛋白的表达 | 第109-110页 |
| ·可溶性GST融合蛋白的提取和纯化 | 第110-111页 |
| ·GST融合蛋白的结合功能分析 | 第111-113页 |
| ·St-CBF基因在E3和CW2-1基因组中拷贝数 | 第113页 |
| ·St-CBF基因在E3和CW2-1中的表达模式 | 第113-114页 |
| ·讨论 | 第114-117页 |
| 第七章 讨论 | 第117-125页 |
| ·启动子选择与马铃薯基因工程 | 第117-119页 |
| ·融合启动子研究 | 第119-121页 |
| ·CBF/DREB类转录因子与马铃薯基因工程改良 | 第121-123页 |
| ·后续研究展望 | 第123-125页 |
| ·低温诱导和块茎特异表达融合启动子的构建研究 | 第123页 |
| ·St-CBF基因的研究 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-141页 |
| 附录A:载体pLB和pCI21A的构建路线图 | 第141-142页 |
| 附录B:融合启动子pLC和pCL的构建路线图 | 第142-143页 |
| 附录C:表达载体pGCK8603的构建路线图 | 第143-144页 |
| 附录D:融合启动子pCL GenBank登记信息 | 第144-145页 |
| 附录E:融合启动子pLC GenBank登记信息 | 第145-146页 |
| 附录F:低温诱导的启动子LTP GenBank登记信息 | 第146-147页 |
| 附录G:发表和已经准备的论文 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
