| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 酵母双杂交技术筛选与CUEDC2相互作用的蛋白质 | 第13-27页 |
| 材料与方法 | 第13-20页 |
| 1.材料及来源 | 第13-14页 |
| ·菌株和质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| 2.实验方法 | 第14-20页 |
| ·pGBKT7-CUEDC2诱饵载体构建 | 第14-17页 |
| ·文库扩增 | 第17页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第17页 |
| ·Western blot分析 | 第17-18页 |
| ·从酵母中提取质粒 | 第18-20页 |
| 结果 | 第20-26页 |
| 1.诱饵表达载体的构建和鉴定 | 第20页 |
| 2.诱饵蛋白在酵母细胞中的表达鉴定 | 第20-21页 |
| 3.诱饵蛋白在酵母细胞中自身转录激活活性的测定 | 第21页 |
| 4.人乳腺文库的扩增 | 第21-22页 |
| 5.初步筛选结果 | 第22-23页 |
| 6.重复鉴定结果 | 第23-24页 |
| 7.筛选到的基因cDNA序列的钓取及克隆 | 第24-26页 |
| 小结 | 第26-27页 |
| 第二部分 CUEDC2与四种蛋白质相互作用的验证 | 第27-46页 |
| 材料与方法 | 第27-33页 |
| 1.材料、试剂及仪器 | 第27-28页 |
| ·质粒、菌株、细胞株 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·细胞培养试剂 | 第27页 |
| ·抗体 | 第27-28页 |
| ·大型仪器 | 第28页 |
| 2.实验方法 | 第28-33页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·GST融合表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·293T细胞瞬时转染 | 第30页 |
| ·GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化 | 第30-31页 |
| ·GST沉淀(GST pull-down)分析 | 第31页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第31-33页 |
| 结果 | 第33-45页 |
| 1.真核表达载体的构建及鉴定 | 第33-36页 |
| 2.GST表达载体的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.GST-CUEDC2融合蛋白质的诱导表达与纯化 | 第37-39页 |
| 4.CUEDC2与酵母筛选所得四种蛋白质相互作用的验证 | 第39-45页 |
| ·CUEDC2与THAP3相互作用验证 | 第39-40页 |
| ·CUEDC2与SOCS3相互作用验证 | 第40-41页 |
| ·CUEDC2与GADD34相互作用验证 | 第41-43页 |
| ·CUEDC2与IKKβ相互作用验证 | 第43-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 第三部分 CUEDC2与GADD34复合物的初步功能研究 | 第46-54页 |
| 材料与方法 | 第46-49页 |
| 1.材料 | 第46-47页 |
| ·细胞株、质粒 | 第46页 |
| ·试剂及仪器 | 第46-47页 |
| 2.实验方法 | 第47-49页 |
| ·细胞转染 | 第47页 |
| ·荧光素酶活性测定方法 | 第47-48页 |
| ·Western blot分析蛋白质表达水平 | 第48页 |
| ·p53的转录活性的测定 | 第48-49页 |
| 结果 | 第49-53页 |
| 1.GADD34对p53转录活性的影响 | 第49页 |
| 2.CUEDC2对p53转录活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.CUEDC2与GADD34复合体对p53转录活性的影响 | 第50-51页 |
| 4.CUEDC2对GADD34蛋白质表达的影响 | 第51-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-55页 |
| 总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 文章发表与交流 | 第61-62页 |
| 附：应用酵母双杂交筛选与CUEDC2相互作用的蛋白质 | 第62-69页 |
