| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-24页 |
| 1. 病毒性神经坏死病概况 | 第12-13页 |
| 2. 鱼类神经坏死病毒的分子结构 | 第13-14页 |
| 3 鱼类神经坏死病毒的危害 | 第14-15页 |
| 4 神经坏死病毒的传播途径 | 第15-16页 |
| 5 神经坏死病毒的检测方法 | 第16-22页 |
| ·显微镜观察法 | 第16-17页 |
| ·免疫学方法 | 第17页 |
| ·分子生物学方法 | 第17-20页 |
| ·细胞培养法 | 第20-22页 |
| 6 病毒性神经坏死病的防治 | 第22-23页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 神经坏死病毒的确认及组织病理学与电镜观察 | 第24-29页 |
| 1 材料 | 第24页 |
| ·实验鱼 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-25页 |
| ·NNV 的 RT-PCR 检测 | 第24-25页 |
| ·组织病理学观察 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-27页 |
| ·NNV 的 RT-PCR 检测结果 | 第25-26页 |
| ·组织病理学与电镜观察结果 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| ·病毒性神经坏死病毒的危害性 | 第27页 |
| ·石斑鱼神经坏死病的病理特征 | 第27-28页 |
| ·石斑鱼 NNV 的传播途径及其防治 | 第28页 |
| 5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 RT-PCR 检测石斑鱼 NNV 方法的建立和应用 | 第29-35页 |
| 1 材料和方法 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-31页 |
| 2 PCR扩增结果的判定 | 第31-32页 |
| ·阳性结果确认 | 第31页 |
| ·PCR反应条件的优化结果 | 第31-32页 |
| 3 方法运用 | 第32页 |
| 4 讨论与小结 | 第32-35页 |
| ·总 RNA 抽取注意事项 | 第32-33页 |
| ·PCR 产物的电泳检测 | 第33页 |
| ·试验中 RT-PCR 存在的问题及解决方法 | 第33页 |
| ·RT-PCR 技术检测神经坏死病毒的特异性和灵敏度 | 第33-35页 |
| 第四章 荧光定量 PCR 法检测石斑鱼神经坏死病毒 | 第35-44页 |
| 1 材料 | 第35页 |
| ·病鱼 | 第35页 |
| ·引物和探针 | 第35页 |
| ·阳性质控品 | 第35页 |
| ·仪器和试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-37页 |
| ·总 RNA 提取 | 第35页 |
| ·探针和引物的设计 | 第35页 |
| ·阳性质控品的制备 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR 反应 | 第36页 |
| 2.S RT-PCR 反应体系和反应程序的优化 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR 的特异性 | 第37页 |
| ·MS2 噬菌体阳性质控品的重复性与稳定性测试 | 第37页 |
| ·MS2 噬菌体阳性质控品线性范围的确定 | 第37页 |
| ·MS2 噬菌体阳性质控品标准曲线的建立 | 第37页 |
| ·临床病料的实时荧光定量 RT-PCR 检测 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR 反应体系的优化 | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR 的特异性的测试 | 第38页 |
| ·RRT-PCR与常规 RT-PCR 敏感度的比较 | 第38页 |
| ·MS2 噬菌体阳性质控品的重复性与稳定性测试 | 第38-39页 |
| ·MS2 噬菌体阳性质控品线性范围的确定 | 第39-40页 |
| ·MS2噬菌体阳性质控品标准曲线的建立 | 第40页 |
| ·临床病料的实时荧光定量 RT-PCR 检测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 5 小结 | 第42-44页 |
| 第五章 点带石斑鱼神经坏死病毒 RNA1 和 RNA2 基因组序列测定和分析 | 第44-53页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| ·病鱼来源 | 第44-45页 |
| ·引物和试剂 | 第45页 |
| ·分析软件 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-46页 |
| ·引物的设计与合成 | 第45页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第45-46页 |
| ·cDNA 合成 | 第46页 |
| ·PCR 扩增 | 第46页 |
| ·PCR 产物检测及纯化 | 第46页 |
| ·基因组序列测定和分析 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-49页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第46-47页 |
| ·点带石斑鱼 NNV 核苷酸序列检测结果 | 第47-49页 |
| 4 点带石斑鱼 NNV 核苷酸序列分析 | 第49-51页 |
| ·核苷酸同源性比较 | 第49-50页 |
| ·氨基酸序列比较 | 第50页 |
| ·系统发育进化分析 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-52页 |
| 6 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 缩略词 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
