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点带石斑鱼病毒性神经坏死病研究

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
第一章 综述第12-24页
 1. 病毒性神经坏死病概况第12-13页
 2. 鱼类神经坏死病毒的分子结构第13-14页
 3 鱼类神经坏死病毒的危害第14-15页
 4 神经坏死病毒的传播途径第15-16页
 5 神经坏死病毒的检测方法第16-22页
   ·显微镜观察法第16-17页
   ·免疫学方法第17页
   ·分子生物学方法第17-20页
   ·细胞培养法第20-22页
 6 病毒性神经坏死病的防治第22-23页
 7 本研究的目的和意义第23-24页
第二章 神经坏死病毒的确认及组织病理学与电镜观察第24-29页
 1 材料第24页
   ·实验鱼第24页
   ·引物第24页
   ·试剂第24页
 2 方法第24-25页
   ·NNV 的 RT-PCR 检测第24-25页
   ·组织病理学观察第25页
 3 结果第25-27页
   ·NNV 的 RT-PCR 检测结果第25-26页
   ·组织病理学与电镜观察结果第26-27页
 4 讨论第27-28页
   ·病毒性神经坏死病毒的危害性第27页
   ·石斑鱼神经坏死病的病理特征第27-28页
   ·石斑鱼 NNV 的传播途径及其防治第28页
 5 小结第28-29页
第三章 RT-PCR 检测石斑鱼 NNV 方法的建立和应用第29-35页
 1 材料和方法第29-31页
   ·材料第29-30页
   ·方法第30-31页
 2 PCR扩增结果的判定第31-32页
   ·阳性结果确认第31页
   ·PCR反应条件的优化结果第31-32页
 3 方法运用第32页
 4 讨论与小结第32-35页
   ·总 RNA 抽取注意事项第32-33页
   ·PCR 产物的电泳检测第33页
   ·试验中 RT-PCR 存在的问题及解决方法第33页
   ·RT-PCR 技术检测神经坏死病毒的特异性和灵敏度第33-35页
第四章 荧光定量 PCR 法检测石斑鱼神经坏死病毒第35-44页
 1 材料第35页
   ·病鱼第35页
   ·引物和探针第35页
   ·阳性质控品第35页
   ·仪器和试剂第35页
 2 方法第35-37页
   ·总 RNA 提取第35页
   ·探针和引物的设计第35页
   ·阳性质控品的制备第35-36页
   ·实时荧光定量 RT-PCR 反应第36页
  2.S RT-PCR 反应体系和反应程序的优化第36-37页
   ·实时荧光定量 RT-PCR 的特异性第37页
   ·MS2 噬菌体阳性质控品的重复性与稳定性测试第37页
   ·MS2 噬菌体阳性质控品线性范围的确定第37页
   ·MS2 噬菌体阳性质控品标准曲线的建立第37页
   ·临床病料的实时荧光定量 RT-PCR 检测第37页
 3 结果第37-41页
   ·实时荧光定量 RT-PCR 反应体系的优化第37-38页
   ·实时荧光定量 RT-PCR 的特异性的测试第38页
   ·RRT-PCR与常规 RT-PCR 敏感度的比较第38页
   ·MS2 噬菌体阳性质控品的重复性与稳定性测试第38-39页
   ·MS2 噬菌体阳性质控品线性范围的确定第39-40页
   ·MS2噬菌体阳性质控品标准曲线的建立第40页
   ·临床病料的实时荧光定量 RT-PCR 检测第40-41页
 4 讨论第41-42页
 5 小结第42-44页
第五章 点带石斑鱼神经坏死病毒 RNA1 和 RNA2 基因组序列测定和分析第44-53页
 1 材料第44-45页
   ·病鱼来源第44-45页
   ·引物和试剂第45页
   ·分析软件第45页
 2 方法第45-46页
   ·引物的设计与合成第45页
   ·总 RNA 的抽提第45-46页
   ·cDNA 合成第46页
   ·PCR 扩增第46页
   ·PCR 产物检测及纯化第46页
   ·基因组序列测定和分析第46页
 3 结果第46-49页
   ·RT-PCR 结果第46-47页
   ·点带石斑鱼 NNV 核苷酸序列检测结果第47-49页
 4 点带石斑鱼 NNV 核苷酸序列分析第49-51页
   ·核苷酸同源性比较第49-50页
   ·氨基酸序列比较第50页
   ·系统发育进化分析第50-51页
 5 讨论第51-52页
 6 小结第52-53页
参考文献第53-58页
缩略词第58-60页
致谢第60页

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