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转基因聚合提高烟草耐盐性的研究

中文摘要第1-12页
Abstract第12-17页
符号说明第17-18页
第一章 前言第18-46页
   ·盐胁迫对植物造成的伤害第18-20页
   ·植物的耐盐机理第20-23页
     ·植物对盐胁迫的形态适应第20页
     ·植物耐盐的分子机理第20-23页
   ·甘氨酸甜菜碱及其相关的植物基因工程第23-31页
     ·甜菜碱的生物合成途径第24-26页
     ·甜菜碱合成的生物基因工程研究第26-29页
     ·甜菜碱的保护机制第29-31页
   ·离子转运及离子平衡的基因工程第31-41页
     ·质膜和液泡膜质子泵第31-36页
     ·质膜和液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白第36-41页
     ·离子通道第41页
   ·耐盐相关基因聚合的研究第41-44页
     ·实现基因聚合的策略和方法第42-43页
     ·耐盐相关基因聚合的研究进展第43-44页
   ·本论文的目的和意义第44-46页
第二章 材料与方法第46-64页
   ·实验材料第46-47页
     ·植物材料及培养基第46页
     ·烟草植株的有性杂交第46页
     ·烟草种子的萌发及无菌苗的生长第46-47页
   ·转基因烟草植株的分子生物学检测第47-52页
     ·PCR检测第47-48页
     ·Southern杂交检测第48-50页
     ·RT-PCR及Real-time RT-PCR检测第50-52页
   ·烟草种子和小苗的耐盐性分析第52页
     ·种子萌发率和生长速率的测定第52页
     ·蛭石培养烟草小苗的耐盐性第52页
   ·盐胁迫条件下烟草植株根系的观察及生物量统计第52-53页
   ·光合作用及叶绿素荧光参数的测定第53页
   ·叶绿素含量的测定第53页
   ·转基因聚合烟草的耐盐性分析第53-57页
     ·膜脂过氧化程度的测定第54页
     ·叶片细胞膜损伤的测定第54页
     ·betA基因的表达及甜菜碱含量的测定第54-55页
     ·TsVP基因的表达及V-H~+-ATPasc和V-H~+-PPasc活性的测定第55-56页
     ·转基因植株中AtNHX1基因表达强度的检测第56页
     ·离子含量的测定第56-57页
   ·转基因烟草耐盐性的细胞学检测第57-62页
     ·植物材料第57页
     ·烟草叶肉原生质体的游离第57-58页
     ·盐胁迫条件下原生质体活力的测定第58页
     ·线粒体完整性的测定第58-59页
     ·烟草细胞胞质和液泡pH的测定第59-61页
     ·跨液泡膜质子电势差的计算第61页
     ·烟草细胞液泡中Na~+积累的测定第61-62页
     ·荧光强度的定量计算第62页
   ·实验数据的统计学分析第62-64页
第三章 实验结果第64-110页
   ·betA和TsVP转基因聚合烟草的耐盐性分析第64-92页
     ·betA和TsVP转基因聚合烟草的获得第64-66页
     ·转基因植株中betA基因表达及甜菜碱含量的测定第66-68页
     ·TsVP基因的表达及V-H~+-ATPase和V-H~+-PPasc活性的测定第68-70页
     ·烟草种子及小苗的耐盐性第70-73页
     ·盐胁迫下不同烟草植株根系和地上部分形态及生物量第73-76页
     ·盐胁迫对烟草植株光合作用和叶绿素荧光参数的影响第76-78页
     ·盐胁迫对叶片叶绿素含量变化的影响第78-79页
     ·细胞膜伤害程度的测定第79-81页
     ·烟草叶片中无机离子含量的测定第81-82页
     ·盐胁迫诱导的液泡中Na~+积累的测定第82-85页
     ·细胞存活率的测定第85-86页
     ·NaCl处理对细胞线粒体完整性的影响第86-87页
     ·不同细胞胞质和液泡pH的测定及跨液泡膜质子电位差的计算第87-92页
   ·聚合betA和AtNHX1基因烟草的耐盐性分析第92-110页
     ·聚合beta和AtNHX1基因烟草的获得第92-94页
     ·盐胁迫下betA基因表达及甜菜碱含量的变化第94-96页
     ·盐胁迫对AtNHX1基因表达的影响第96页
     ·转基因聚合(betA×AtNHX1)烟草种子及小苗的耐盐性第96-100页
     ·不同株系植株的细胞膜受损程度的测定第100-101页
     ·烟草不同株系叶片中无机离子含量的测定第101-102页
     ·盐胁迫下不同株系的液泡Na~+积累量测定第102-104页
     ·不同株系原生质体活力的差异第104-105页
     ·线粒体完整性的检测第105-106页
     ·不同株系细胞的胞质和液泡pH测定及跨液泡膜质子电位的计算第106-110页
第四章 讨论第110-116页
   ·转基因聚合提高植物耐盐性的目标与现实第110-111页
   ·转betA、TsVP和AtNHX1基因提高烟草植株耐盐性的探讨第111-113页
   ·细胞耐盐性与植株耐盐性的对应关系第113-114页
   ·转基因聚合植株的耐盐性与转单基因植株的差异第114-116页
第五章 总结与展望第116-118页
参考文献第118-134页
致谢第134-135页
攻读学位期间发表的学术论文目录第135-136页
学位论文评阅及答辩情况表第136-137页
附件第137-175页

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