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抗人DR5单克隆抗体诱导人食管癌细胞凋亡的机制研究

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-13页
正文部分第13-70页
 前言第13-15页
 第一部分 重组人可溶性 DR5 蛋白的制备及抗 DR5 单克隆抗体的研制第15-27页
   ·序言第15页
   ·材料、试剂与仪器第15-17页
     ·实验动物第15页
     ·菌株和NS-1 细胞株第15页
     ·主要生化试剂第15-16页
     ·主要仪器第16-17页
   ·方法与步骤第17-20页
     ·可溶性死亡受体5(sDR5)的制备第17-18页
     ·免疫印记检测sDR5 的特异性第18页
     ·sDR5 免疫 BALb/c 小鼠第18页
     ·细胞融合第18-19页
     ·杂交瘤的筛选及单克隆抗体 Ig 亚类鉴定第19页
     ·腹水mDRA-6 的制备及纯化第19-20页
     ·免疫印迹检测mDRA-6 的特异性第20页
     ·mAb 的细胞凋亡活性分析第20页
   ·实验结果第20-24页
     ·纯化的重组人sDR5 蛋白纯度及表观分子量第21页
     ·纯化的重组人sDR5 蛋白的免疫印迹结果第21页
     ·杂交瘤细胞株的建立及抗体纯化第21-22页
     ·mDRA-6 的特异性及凋亡活性分析第22-24页
   ·讨论第24-25页
   ·参考文献第25-27页
 第二部分 功能抗体mDRA-6 对人食管癌细胞诱导凋亡的机制研究第27-46页
   ·序言第27页
   ·材料、仪器与试剂第27-29页
     ·细胞系第27页
     ·主要试剂及配制第27-29页
     ·主要仪器第29页
   ·实验方法及步骤第29-35页
     ·细胞表面 DR5 的表达检测第29-30页
     ·mDRA-6 诱导细胞凋亡的毒性测定(MTT 法)第30页
     ·细胞凋亡形态学观察第30页
     ·DNA ladder 检测细胞凋亡第30-31页
     ·Annexin Ⅴ/PI 双染法检测细胞凋亡情况第31页
     ·细胞凋亡线粒体膜电位的检测第31-32页
     ·免疫印迹技术(Western blotting)检测细胞凋亡的蛋白信号途径第32-35页
   ·实验结果第35-40页
     ·细胞表面 DR5 的表达结果第35-36页
     ·mDRA-6 对4 种细胞凋亡的毒性测定结果(MTT 法)第36-37页
     ·mDRA-6 诱导细胞凋亡的形态变化第37页
     ·DNA ladder 检测细胞凋亡第37-38页
     ·流式细胞术检测细胞凋亡结果第38页
     ·线粒体膜电位的检测结果第38-39页
     ·Western blotting 检测细胞凋亡信号结果第39-40页
   ·讨论第40-44页
   ·参考文献第44-46页
 第三部分 功能抗体mDRA-6抗肿瘤作用的动物学实验第46-53页
   ·序言第46页
   ·材料、仪器与方法第46-49页
     ·实验动物及细胞株第46页
     ·主要仪器第46页
     ·主要试剂及配方第46-47页
     ·光镜标本的制备第47-48页
     ·H-E 染色原理和方法第48页
     ·荷瘤小鼠模型的建立第48-49页
     ·肿瘤组织形态学的观察第49页
   ·结果第49-52页
     ·肿瘤的scid 小鼠动物模型第49页
     ·mDRA-6 对肿瘤的疗效观察第49-50页
     ·对小鼠肿瘤解剖结果的测量与观察第50页
     ·对不同治疗组肿瘤组织的常规 HE 染色第50-51页
     ·对不同治疗组肿瘤组织用Hoechst 33258染色第51页
     ·mDRA-6 对scid 小鼠移植肿瘤的治疗效果与时间的关系第51-52页
   ·讨论第52-53页
 第四部分 结论第53-54页
 第五部分 文献综述 TRAIL 受体与肿瘤治疗的研究进展第54-70页
   ·概述第54页
   ·TRAIL 及其受体第54-57页
     ·TRAIL/Apo2L 结构及基因第54-55页
     ·TRAIL/Apo2L 的受体第55-57页
   ·TRAIL/Apo2L 介导的细胞凋亡第57-59页
   ·对TRAIL敏感与耐受的分子机制第59-62页
   ·抗 DR4、抗 DR5 的功能性凋亡抗体临床应用第62-63页
   ·结论及展望第63页
   ·参考文献第63-70页
主要缩略语第70-71页
研究生期间发表的论文第71-72页
致谢第72页

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