| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-23页 |
| 一、p16~(INK4a) 基因及其转录调控机制的研究进展 | 第8-10页 |
| （一） p16~(INK4a) 基因的发现 | 第8页 |
| （二） p16~(INK4a) 蛋白与肿瘤发生 | 第8-9页 |
| （三） p16~(INK4a) 基因的结构及其转录调控 | 第9-10页 |
| 二、组蛋白乙酰化修饰与真核生物基因的转录调控 | 第10-17页 |
| （一） 染色质重塑与转录调控 | 第10-11页 |
| （二） 组蛋白乙酰化修饰与转录调控 | 第11-17页 |
| 三、Sp1 的结构及与其他蛋白的相互作用 | 第17-19页 |
| 四、双杂交的研究进展 | 第19-22页 |
| （一） 什么是双杂交系统 | 第19-21页 |
| （二） 双杂交技术新的发展 | 第21页 |
| （三） 双杂交技术新的应用 | 第21-22页 |
| 五、本论文研究的内容及意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第23-32页 |
| 一、实验材料 | 第23页 |
| （一） 质粒 | 第23页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第23页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第23页 |
| （四） 试剂 | 第23页 |
| 二、实验方法 | 第23-32页 |
| I. 分子生物学试验方法 | 第23-28页 |
| （一） 分子克隆 | 第23页 |
| （二） DNA 的琼脂糖电泳 | 第23-24页 |
| （三） 质粒大量制备的方法 | 第24-25页 |
| （四） 哺乳动物细胞总RNA 的提取 | 第25-26页 |
| （五） 逆转录 | 第26-27页 |
| （六） PCR 和Real-time PCR | 第27-28页 |
| II. 细胞生物学实验方法 | 第28-32页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第28页 |
| （二） 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第28-30页 |
| （三） 蛋白质的 Western Blotting 分析 | 第30-32页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第32-41页 |
| 一、Sp1 与p300 协同调控p16~(INK4a) 的表达 | 第32-33页 |
| 二、Sp1 与p300 的相互作用 | 第33-41页 |
| （一） 哺乳动物双杂交的原理 | 第33-34页 |
| （二） 重组质粒的构建及验证 | 第34-38页 |
| （三） 转染及双报告检测 | 第38-41页 |
| 第四部分 讨论 | 第41-45页 |
| 一、Sp1 与p300 协同调控p16~(INK4a)的表达 | 第41页 |
| 二、Sp1 与p300 的相互作用 | 第41-42页 |
| 三、哺乳动物双杂交体系的选择 | 第42-45页 |
| （一） 蛋白间的相互作用在细胞内是普遍发生的 | 第42-43页 |
| （二） 双杂交技术是研究蛋白间相互作用的更好手段 | 第43页 |
| （三） 哺乳动物双杂交是酵母双杂交改良后在哺乳动物细胞中的应用 | 第43-45页 |
| 第五部分 结论 | 第45-46页 |
| 一、Sp1 与 p300 协同调控 p16~(INK4a)的表达 | 第45页 |
| 二、p300 的 Q 区及 Sp1 的 N 端在 p300 与 Sp1 的相互作用中发挥主要作用 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 在校期间公开发表论文及著作情况 | 第56页 |
