| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 α/β水解酶超家族 | 第14-18页 |
| ·α/β水解酶的结构 | 第14-15页 |
| ·α/β水解酶的一般特征 | 第15-16页 |
| ·α/β水解酶所催化的反应 | 第16-18页 |
| 2 C-C水解酶家族 | 第18-20页 |
| ·概述 | 第18页 |
| ·C-C水解酶催化机制 | 第18-20页 |
| 3 HOPDA水解酶 | 第20-22页 |
| 4 酶催化机制的研究方法 | 第22-23页 |
| 5 本论文研究的目的和意义 | 第23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二章 Trp在C-C水解酶催化中的关键角色 | 第28-38页 |
| 1 材料与方法 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·水解酶的定点突变 | 第29-30页 |
| ·突变酶的表达纯化 | 第30页 |
| ·水解酶的酶活测定 | 第30页 |
| ·动力学参数的测定 | 第30页 |
| ·水解酶的化学修饰 | 第30-31页 |
| ·水解酶的CD谱测定 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-35页 |
| ·HOPDA水解酶序列比对 | 第31页 |
| ·水解酶突变体表达纯化 | 第31-32页 |
| ·突变酶的动力学分析 | 第32-33页 |
| ·突变体的化学修饰 | 第33-34页 |
| ·水解酶的CD谱分析 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第三章 突变酶前稳态动力学分析 | 第38-52页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·菌株来源 | 第39页 |
| ·试剂与仪器 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-40页 |
| ·2,3-二羟基联苯双加氧酶BphC的制备 | 第39页 |
| ·2-羟基,6-氧,6-苯基-2,4-己二烯酸水解酶突变体的获得 | 第39-40页 |
| ·底物HOPDA的制备 | 第40页 |
| ·BphD非稳态动力学研究 | 第40页 |
| ·BphD酶-底物复合物检测 | 第40页 |
| 3 结果分析 | 第40-49页 |
| ·野生型BphD的非稳态动力学分析 | 第40-42页 |
| ·BphD突变体的非稳态动力学分析 | 第42-47页 |
| ·BphD酶-底物复合物检测 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第四章 水解酶易错文库的构建 | 第52-61页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| ·菌株和载体 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·主要酶和化学试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器设备 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-55页 |
| ·BphD基因内部EcoR Ⅰ位点的突变 | 第53-54页 |
| ·R04水解酶易错文库的构建 | 第54-55页 |
| ·筛选方法的建立 | 第55页 |
| 3 结果分析 | 第55-59页 |
| ·BphD基因内部EcoR Ⅰ点的突变 | 第55页 |
| ·易错PCR条件的确定 | 第55-56页 |
| ·易错文库的构建 | 第56-58页 |
| ·联苯水解酶突变体筛选方法的建立 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简况及联系方式 | 第64-66页 |