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拟南芥Aux/IAA家族基因IAA2的反向遗传学功能研究

缩略词表第1-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-13页
第一章 文献综述第13-38页
   ·生长素在植物生长发育中作用机理研究进展第13-22页
     ·生长素对拟南芥叶片发育的影响第14-15页
     ·生长素对下胚轴伸长的影响第15-16页
     ·生长素对植物早期发育的影响第16-19页
     ·生长素对根发育的影响第19-21页
     ·生长素对花器官形成和开花的影响第21-22页
   ·IAA的内稳态第22-27页
     ·IAA的合成第22-23页
     ·生长素运输第23-26页
     ·IAA的代谢第26-27页
   ·生长素信号转导第27-38页
     ·生长素受体第28-30页
     ·Aux/IAA第30-33页
     ·ARF第33-35页
     ·SCF~(TIRI)第35-38页
第二章 材料和方法第38-53页
   ·拟南芥种子第38页
   ·质粒第38页
   ·拟南芥生长条件第38页
   ·IAA2 TILLING种子鉴定第38-39页
   ·表达载体构建第39-46页
     ·过量表达iaa2-1、iaa2-2、iaa2-3的IAA2基因突变序列第39页
     ·IAA2基因启动子表达构建第39-40页
     ·基于Gateway~(TM)的IAA2表达载体构建第40-44页
     ·基于Gateway~(TM)的荧光共振能量转移表达载体构建第44-45页
     ·基于Gateway~(TM)的GUS C端和N端表达载体构建第45-46页
   ·表型分析第46-47页
     ·根、下胚轴长度第46页
     ·根、下胚轴向地性第46页
     ·根生长素抗性实验第46页
     ·不定根数统计第46-47页
     ·成年植株表型观察第47页
   ·表达分析第47-48页
     ·半定量检测mRNA表达量第47页
     ·GUS报告基因表达分析第47页
     ·显微观察蛋白表达第47-48页
     ·Western-blots检测蛋白表达第48页
   ·荧光共振能量转移方法研究蛋白之间互作第48-49页
     ·荧光共振能量转移实验材料初步建立第48-49页
     ·拟南芥杂交第49页
   ·本文设计的引物和构建的载体第49-53页
第三章 结果和分析第53-91页
   ·拟南芥IAA2 TILLING种子发现了三个突变体但都没有表型第53-58页
     ·IAA2基因TILLING种子遗传分析第53-56页
     ·过量表达IAA2错误蛋白同样没有表型第56-58页
   ·IAA2基因过量表达和RNA干涉IAA2基因并不引起表型表化第58-60页
     ·IAA2过量表达、RNA干涉转基因株系获得第58页
     ·转基因株系没有表型第58页
     ·转基因株系对生长素敏感第58-60页
   ·拟南芥IAA2基因启动子功能研究第60-64页
     ·拟南芥IAA2启动子的克隆和表达载体的构建第61页
     ·pIAA2L∷GUS转基因株系获得第61页
     ·pIAA2L∷GUS表达情况第61-64页
   ·IAA2基因亚细胞定位第64-65页
     ·IAA2 C端、N端融合转基因株系获得第64-65页
     ·IAA2蛋白亚细胞定位第65页
   ·IAA2 Domain Ⅱ的脯氨酸功能研究第65-80页
     ·IAA2基因保守结构域Ⅱ的BglⅡ酶切位点有助于定点突变和回复突变第65-67页
     ·iaa2表达载体鉴定第67页
     ·pIAA2L控制的iaa2表达载体鉴定第67-68页
     ·表达载体转化拟南芥第68页
     ·突变体表型分析第68-80页
   ·IAA2基因机理研究第80-91页
     ·显微观察和western-blots方法检测突变体蛋白降解速度第81-85页
     ·GUS融合的表达载体构建来研究IAA2蛋白(?)素化第85-86页
     ·荧光共振能量转移活体研究蛋白互作第86-91页
第四章 讨论第91-106页
   ·IAA2研究背景第91页
   ·IAA2在植物发育过程中高度表达第91-93页
   ·TILLING技术是一种高通量、低成本的反向遗传学研究方法第93-96页
     ·TILLING技术原理第93-94页
     ·TILLING技术的优点第94-95页
     ·拟南芥TILLING种子的缺点第95-96页
   ·简单、高效的Gateway重组克隆系统第96-98页
     ·Gateway重组克隆系统的原理第96页
     ·Gateway重组克隆系统的优点第96-98页
     ·pCAMBIA载体系统缺陷第98页
   ·IAA2蛋白在拟南芥生长和发育具有功能冗余性第98-101页
   ·IAA2在拟南芥生长和发育具有一些独特的功能第101-102页
   ·IAA2保守结构域Ⅱ相邻的两个脯氨酸在蛋白稳定性上起到双重作用第102-104页
   ·荧光共振能量转移活体检测蛋白互作第104-106页
致谢第106-107页
参考文献第107-127页

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