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芽孢杆菌(Bacillus spp.)拮抗菌株的筛选及TasA基因研究

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
引言第12-14页
1 文献综述第14-32页
   ·生物防治的重要性第14-15页
   ·生防微生物的应用第15-17页
     ·微生物防治的研究进展第15-16页
     ·微生物防治的优点和制剂种类第16页
     ·微生物防治中生防细菌的应用第16-17页
   ·芽孢杆菌在生物防治中的应用第17-20页
     ·芽孢杆菌的特点第17页
     ·芽孢杆菌的分类第17页
     ·芽孢杆菌作为生防菌的应用第17-18页
     ·芽孢杆菌拮抗作用第18-20页
       ·芽孢杆菌拮抗作用和产生的拮抗物质种类第18-19页
       ·芽孢杆菌细菌素的应用优势第19页
       ·芽孢杆菌抗菌蛋白的应用前景第19-20页
   ·枯草芽孢杆菌的应用第20-26页
     ·枯草芽孢杆菌在生物防治上的重要意义第20页
     ·枯草芽孢杆菌作为科学研究的意义第20页
     ·枯草芽孢杆菌的生防制剂第20-21页
     ·枯草芽孢杆菌的抑菌机理第21-23页
       ·竞争作用第21-22页
       ·诱导抗病性(ISR)第22页
       ·促生作用第22页
       ·拮抗作用第22-23页
     ·枯草芽孢杆菌的抑菌物质第23-25页
       ·细菌素第23页
       ·抑菌蛋白第23-25页
     ·内生枯草芽孢杆菌的抑菌机理第25-26页
       ·在植物体内的定殖检测第25页
       ·防病机制第25-26页
   ·抗菌蛋白基因的原核表达第26-27页
   ·绿色荧光蛋白(GFP)基因及其在原核生物中的应用第27-29页
     ·GFP的性质和结构第27页
     ·GFP在原核生物研究中的应用第27-28页
     ·GFP与原核生物基因的表达第28页
     ·GFP与细菌生态学第28-29页
   ·甘薯蔓割病的研究进展第29-30页
   ·本研究的目的意义第30-32页
2 芽孢杆菌的筛选和作用机理第32-61页
   ·材料和方法第32-36页
     ·材料第32-33页
       ·供试芽孢杆菌菌株第32页
       ·供试真菌菌株第32-33页
       ·供试细菌菌株第33页
     ·方法第33-36页
       ·芽孢杆菌拮抗菌的筛选第33-34页
       ·芽孢杆菌抑菌机理的研究第34页
       ·芽孢杆菌菌株的生长曲线测定第34-35页
       ·芽孢杆菌16SrRNA鉴定第35-36页
   ·结果与分析第36-59页
     ·芽孢杆菌拮抗菌株的筛选第36-41页
     ·芽孢杆菌对细菌的拮抗作用第41-42页
     ·芽孢杆菌对甘薯蔓割病菌的抑菌机理第42-48页
       ·对甘薯蔓割病菌抑制作用第43-44页
       ·挥发性代谢物质对甘薯蔓割病菌菌丝的拮抗作用第44页
       ·对甘薯蔓割病菌分生孢子形成抑制作用第44页
       ·对甘薯蔓割病菌分生孢子萌发抑制作用第44-45页
       ·芽孢杆菌25-9菌株的生长曲线第45-46页
       ·芽孢杆菌处理后甘薯蔓割病菌菌丝的变化第46-48页
     ·芽孢杆菌对香蕉炭疽病病菌抑菌机理的研究第48-52页
       ·对菌丝生长速率的影响第48-49页
       ·对分生孢子萌发的抑制作用第49-50页
       ·对病菌生长的抑制作用第50页
       ·对菌丝形态的影响第50-52页
     ·芽孢杆菌对小白菜黑斑病菌的抑菌机理第52-55页
     ·芽孢杆菌的分子生物学鉴定第55-59页
   ·小结和讨论第59-61页
     ·拮抗菌的筛选第59页
     ·芽孢杆菌抑菌机理第59页
     ·芽孢杆菌菌株培养滤液的抑菌效果第59-60页
     ·室内平板拮抗作用与活体测试效果比较第60页
     ·关于优良拮抗菌株混合培养的一点设想第60-61页
3 芽孢杆菌防治甘薯蔓割病的生理机制第61-77页
   ·材料与方法第61-63页
     ·材料第61页
       ·供试甘薯品种第61页
       ·供试菌株第61页
       ·接种和取样方法第61页
     ·测定方法第61-63页
   ·结果与分析第63-72页
     ·芽孢杆菌对甘薯感染蔓割病后光合作用的影响第63-67页
       ·对叶片叶绿素含量及组成的影响第63-66页
       ·叶片气孔导度、蒸腾速率、胞间CO_2浓度、净光合速率的变化第66-67页
     ·芽孢杆菌对甘薯感染蔓割病后脂质过氧化的影响第67-71页
       ·对叶片H_2O_2含量的影响第67-68页
       ·对叶片丙二醛含量的影响第68页
       ·对叶片O_2产生速率的影响第68-69页
       ·对叶片电导率的影响第69-70页
       ·对叶片超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响第70页
       ·对叶片过氧化物酶(POD)活性的影响第70-71页
       ·对叶片过氧化氢酶(cAT)活性的影响第71页
     ·芽孢杆菌对甘薯感染蔓割病后盆栽试验效果第71-72页
   ·小结与讨论第72-77页
4 枯草芽孢杆菌绿色荧光蛋白高效表达载体的构建第77-84页
   ·材料和方法第77-78页
     ·材料第77页
     ·方法第77-78页
       ·制备模板第77页
       ·引物第77-78页
       ·热循环参数第78页
       ·遗传转化与基因重组第78页
       ·工程菌株发光表型观察第78页
       ·工程菌株稳定性测定第78页
   ·结果第78-81页
     ·重组质粒的构建第78-79页
     ·P43测序列比对结果第79-80页
     ·芽孢杆菌标记系统的构建第80页
     ·质粒遗传稳定性检测第80-81页
   ·讨论第81-84页
5 抗菌蛋白基因TasA的克隆与表达第84-100页
   ·材料第84-85页
     ·菌株和质粒第84页
     ·培养基第84-85页
     ·试剂盒第85页
   ·方法第85-89页
     ·枯草芽孢杆菌BS168基因组的提取第85页
     ·PCR反应第85-86页
       ·PCR引物第85页
         ·PCR反应体系第85-86页
       ·反应条件第86页
       ·琼脂糖凝胶电泳第86页
     ·PCR产物胶回收第86页
     ·重组表达质粒p43TasA的构建及DNA序列测序第86-88页
       ·双酶切目的DNA与载体p43GFP第86-87页
       ·从琼脂糖凝胶中回收目的DNA与载体p43GFP第87页
       ·目的DNA与载体p43GFP连接第87页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第87页
       ·重组质粒提取,PCR和酶切验证第87-88页
       ·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化第88页
       ·枯草芽孢杆菌质粒的提取第88页
       ·枯草芽孢杆菌质粒PCR及酶切验证第88页
       ·DNA序列测定及分析第88页
     ·工程菌蛋白质表达第88-89页
       ·蛋白质的表达第88-89页
       ·SDS-PAGE第89页
     ·工程菌抑菌谱测定第89页
   ·结果与分析第89-97页
     ·PCR扩增TasA基因第89-90页
     ·重组质粒p43-TasA克隆子PCR和酶切鉴定第90-91页
     ·DNA序列测定及分析第91-92页
     ·工程菌质粒的PCR及酶切鉴定第92-94页
     ·工程菌蛋白质表达第94-96页
     ·工程菌抑菌谱测定第96-97页
   ·讨论第97-100页
     ·关于枯草芽孢杆菌抑菌蛋白的应用第97页
     ·克隆条件的探索第97页
     ·TasA的表达第97页
     ·研究工作展望第97-100页
小结第100-101页
参考文献第101-111页
缩写词和英汉对照第111-113页
攻博期间发表和整理的论文第113-114页
致谢第114页

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