| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 一 文献综述 | 第10-32页 |
| 1 番木瓜环斑病毒（PRSV）及其抗病策略 | 第10-17页 |
| ·前言 | 第10页 |
| ·番木瓜环斑病毒病 | 第10-12页 |
| ·症状 | 第11页 |
| ·病原 | 第11-12页 |
| ·PRSV 分子生物学 | 第12页 |
| ·PRSV 的抗病策略 | 第12-17页 |
| ·外壳蛋白(Coat Protein，CP)基因介导的抗性 | 第13-15页 |
| ·复制酶(replicase ,RP)基因介导的抗性 | 第15-16页 |
| ·运动蛋白(Movement Protein,MP)基因介导的抗性 | 第16-17页 |
| ·其他基因介导的抗性 | 第17页 |
| 2 RNA 沉默（或称RNA 干扰）技术 | 第17-27页 |
| ·RNA 沉默（或称RNA 干扰）技术理论基础及其可行性 | 第18页 |
| ·RNAi 的可能形成机制 | 第18-21页 |
| ·RNAi 表现特征 | 第21-22页 |
| ·RNAi 是转录后水平的基因沉默机制 | 第21页 |
| ·RNAi 具有很高的特异性 | 第21-22页 |
| ·RNAi 抑制基因的表达依赖于dsRNA 剂量 | 第22页 |
| ·RNAi 的干涉效应可以进行局部和系统性的扩散 | 第22页 |
| ·RNAi 生物学意义 | 第22-24页 |
| ·调节基因表达和发育 | 第22-23页 |
| ·基因组免疫 | 第23-24页 |
| ·沉默的病毒抑制子 | 第24-26页 |
| ·RNAi 技术的应用前景 | 第26-27页 |
| 3 花粉管通道技术 | 第27-30页 |
| ·花粉管通道法的起源与创立 | 第27-28页 |
| ·外源DNA 通过花粉管通道导入受体的验证 | 第28-29页 |
| ·待转基因种类和转化方法 | 第29-30页 |
| ·花粉管通道法转化率的影响因素 | 第30页 |
| ·利用花粉管通道法的优点 | 第30页 |
| 4 本研究的目的意义和技术路线 | 第30-32页 |
| ·目的意义 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| 二 材料和方法 | 第32-43页 |
| 1 材料和试剂 | 第32页 |
| ·菌种和植物材料 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-43页 |
| ·PRSV-CP 基因克隆 | 第32-37页 |
| ·总RNA 提取 | 第32-33页 |
| ·RNA 纯度及完整性检测 | 第33页 |
| ·PRSV-CP 引物设计 | 第33页 |
| ·反转录合成cDNA 第一链 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第34页 |
| ·PCR 产物回收 | 第34-35页 |
| ·回收的PCR 片段与T-载体连接 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第36页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·PRSV-CP 基因序列比较 | 第37页 |
| ·PRSV-CP 基因同源片段引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| ·PRSV-CP 基因同源片段的获得 | 第38页 |
| ·正向、反向、正义链、反义链片段的获得 | 第38页 |
| ·内含子片段的获得 | 第38页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·pBCP+、pBCP -表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·p2301CP+、p2301-CP-表达载体的构建 | 第39页 |
| ·p2301CPU 载体的构建 | 第39页 |
| ·p2301CPUL 表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的获得及鉴定 | 第40-41页 |
| ·农杆菌感受太细胞的制备 | 第40页 |
| ·农杆菌EHA105 的转化 | 第40-41页 |
| ·筛选与鉴定 | 第41页 |
| ·花粉管介导番木瓜PRSV-CP 基因同源片段转化与果实的生长 | 第41-42页 |
| ·质粒直接导入技术 | 第41-42页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第41页 |
| ·质粒的纯化 | 第41页 |
| ·质粒DNA 质量检测 | 第41页 |
| ·导入质粒DNA | 第41-42页 |
| ·菌液导入 | 第42页 |
| ·菌液准备 | 第42页 |
| ·导入菌液 | 第42页 |
| ·转基因植株检测 | 第42-43页 |
| ·番木瓜总DNA 提取 | 第42-43页 |
| ·PCR 鉴定 | 第43页 |
| 三 结果与分析 | 第43-53页 |
| 1 感病总RNA 电泳检测 | 第43-44页 |
| 2 RT-PCR 电泳检测 | 第44页 |
| 3 PRSV-CP 基因的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 4 我国番木瓜主要生产种植区的PRSV-CP 基因的序列比较分析 | 第45页 |
| 5 同源片段以及正向、反向，正义链、反义链的获得 | 第45页 |
| 6 内含子片段以及含内含子的正义链片段的获得 | 第45-47页 |
| 7 植物表达载体构建 | 第47-49页 |
| ·含插入片段的中间克隆载体酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体的构建的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 8 重组农杆菌的鉴定 | 第49页 |
| 9 番木瓜转化座果率 | 第49-50页 |
| 10 转基因T1 代成株率 | 第50-51页 |
| 11PCR 检测 | 第51-53页 |
| 四 讨论 | 第53-58页 |
| 1 关于构建RNAi 植物表达载体的关键技术问题 | 第53页 |
| 2 花粉管通道技术在作物遗传改良中应用前景 | 第53-56页 |
| ·花粉管通道技术在作物遗传改良中的可行性 | 第53-54页 |
| ·质粒DNA 导入番木瓜的花粉管通道方法的建立 | 第54-55页 |
| ·花粉管通道转化技术需要进一步解决的问题 | 第55页 |
| ·花粉管通道技术在番木瓜生产上应用潜能 | 第55-56页 |
| 3 RNAi 技术在培育番木瓜广谱抗病育种中的效果预测 | 第56-58页 |
| ·RNAi 技术在番木瓜中的应用潜能 | 第56页 |
| ·本研究已取得的工作成果对后续研究的重要影响 | 第56页 |
| ·下一步的研究工作计划 | 第56-58页 |
| 五 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附图 | 第64-71页 |
| 论文涉及的部分缩略词(Abbreviation) | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
