| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-46页 |
| ·猪圆环病毒研究进展 | 第15-42页 |
| ·猪圆环病毒及其分子生物学 | 第15-22页 |
| ·猪圆环病毒的发现 | 第15页 |
| ·PCV的分类地位 | 第15-16页 |
| ·PCV病原特征 | 第16-17页 |
| ·PCV的分子生物学特征 | 第17页 |
| ·ORF1基因研究 | 第17-18页 |
| ·ORF2基因研究 | 第18-20页 |
| ·ORF3基因研究 | 第20页 |
| ·PCV复制机制的研究 | 第20-22页 |
| ·猪圆环病毒的流行病学 | 第22-26页 |
| ·PCV的宿主 | 第23页 |
| ·PCV的传播途径 | 第23-24页 |
| ·PCV流行传播的特点 | 第24-26页 |
| ·PCV的分子流行病学研究 | 第26页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第26-31页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合征 | 第27-29页 |
| ·猪皮炎与肾病综合征 | 第29-30页 |
| ·母猪繁殖障碍 | 第30页 |
| ·猪呼吸道疾病综合征 | 第30页 |
| ·增生性坏死性肺炎 | 第30-31页 |
| ·先天性震颤 | 第31页 |
| ·动物模型 | 第31-34页 |
| ·PCV2单独感染动物模型的建立 | 第32页 |
| ·PCV2与其他病原混合感染动物模型的建立 | 第32-33页 |
| ·PCV2感染小动物模型的建立 | 第33-34页 |
| ·PCV2与免疫系统关系研究 | 第34-37页 |
| ·PCV2对免疫细胞的影响 | 第34页 |
| ·PCV2感染对细胞因子的影响 | 第34-35页 |
| ·免疫刺激对PCV2的感染的影响 | 第35-37页 |
| ·疫苗免疫在预防PCV2感染中的作用 | 第35-36页 |
| ·免疫刺激增强PCV2的感染 | 第36-37页 |
| ·圆环病毒诊断方法研究 | 第37-40页 |
| ·原位杂交法 | 第37页 |
| ·免疫组织化学法 | 第37-38页 |
| ·聚合酶链反应法 | 第38-39页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光法及免疫过氧化物酶单层试验 | 第39-40页 |
| ·病毒分离 | 第40页 |
| ·PCV2疫苗研究 | 第40-41页 |
| ·PCV2的公共卫生意义 | 第41-42页 |
| ·核酸疫苗研究进展 | 第42-43页 |
| ·"自杀性"DNA疫苗的研究进展 | 第43-44页 |
| ·蛋白转导的研究进展 | 第44页 |
| ·伪狂犬病毒活疫苗载体的研究进展 | 第44-46页 |
| 第二章 目的与意义 | 第46-48页 |
| 第三章 PCV2 ORF2及BHV-1 VP22基因在真核细胞中的表达及定位研究 | 第48-59页 |
| ·材料与方法 | 第48-55页 |
| ·试验材料 | 第48-51页 |
| ·细胞系、菌株和毒株 | 第48页 |
| ·质粒、载体 | 第48页 |
| ·引物 | 第48-49页 |
| ·酶及生化试剂 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·ORF2基因的PCR扩增 | 第51页 |
| ·BVP22基因的PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的回收 | 第52页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·连接产物的转化 | 第52-53页 |
| ·质粒的小量提取与鉴定 | 第53页 |
| ·真核表达质粒pNORF2、pNBVP22的构建 | 第53-54页 |
| ·真核表达质粒的大量制备 | 第54-55页 |
| ·真核质粒的转染 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-59页 |
| ·ORF2和BVP22基因的PCR扩增 | 第55页 |
| ·pTORF2和pTBVP22的鉴定 | 第55-56页 |
| ·真核表达质粒pNORF2、pNBVP22的鉴定 | 第56页 |
| ·ORF2、BVP22基因在Hela细胞中的表达 | 第56-59页 |
| 第四章 PCV2核酸疫苗的构建及免疫效应研究 | 第59-74页 |
| ·材料与方法 | 第59-69页 |
| ·试验材料 | 第59-62页 |
| ·质粒和菌株 | 第59-60页 |
| ·酶及生化试剂 | 第60页 |
| ·PCR引物 | 第60页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第60-61页 |
| ·试验动物 | 第61-62页 |
| ·试验方法 | 第62-69页 |
| ·ORF2及BVP22基因的PCR扩增 | 第62-63页 |
| ·质粒pCORF2的构建 | 第63-64页 |
| ·质粒pCORF2BVP22的构建 | 第64页 |
| ·质粒pCBVP22ORF2的构建 | 第64页 |
| ·质粒pSORF2的构建 | 第64-66页 |
| ·质粒pMORF2的构建 | 第66页 |
| ·质粒pSBO的构建 | 第66页 |
| ·质粒pMBO的构建 | 第66-67页 |
| ·核酸疫苗的大量制备 | 第67页 |
| ·试验动物免疫 | 第67-68页 |
| ·ORF2抗原的表达与纯化 | 第68页 |
| ·ELISA方法检测体液抗体 | 第68页 |
| ·统计学方法 | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-74页 |
| ·ORF2与BVP22基因PCR扩增 | 第69页 |
| ·pCORF2、pCORF2BVP22、pCBVP22ORF2的鉴定 | 第69页 |
| ·pSORF2、pMORF2、pSBO、pMBO的鉴定 | 第69页 |
| ·ELISA方法检测体液抗体 | 第69-74页 |
| 第五章 表达PCV2 ORF2基因的重组伪狂犬疫苗毒株的构建及免疫效应研究 | 第74-96页 |
| ·材料与方法 | 第75-86页 |
| ·试验材料 | 第75-79页 |
| ·细胞和毒株 | 第75页 |
| ·菌株和质粒 | 第75页 |
| ·引物 | 第75页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第75-76页 |
| ·缓冲液 | 第76-79页 |
| ·SDS PAGE缓冲液 | 第76-77页 |
| ·Western blotting缓冲液 | 第77页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第77-78页 |
| ·Southern blotting用缓冲液 | 第78页 |
| ·其它缓冲液 | 第78-79页 |
| ·实验动物 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-86页 |
| ·ORF2基因的扩增 | 第79页 |
| ·重组转移质粒pIEORF2的构建 | 第79页 |
| ·伪狂犬病毒的传代 | 第79页 |
| ·伪狂犬病毒基因组的提取 | 第79-80页 |
| ·重组病毒的构建 | 第80页 |
| ·空斑法纯化病毒 | 第80-81页 |
| ·Southern blotting鉴定重组病毒 | 第81-82页 |
| ·探针的制备 | 第81页 |
| ·转印 | 第81页 |
| ·转印膜的干燥与固定 | 第81-82页 |
| ·预杂交和杂交 | 第82页 |
| ·洗膜 | 第82页 |
| ·免疫检测 | 第82页 |
| ·ORF2在重组病毒中表达检测 | 第82-84页 |
| ·Western blotting检测ORF2基因的表达 | 第82-83页 |
| ·间接免疫荧光法检测ORF2基因的表达 | 第83-84页 |
| ·病毒的冻干 | 第84页 |
| ·重组病毒在各种细胞上毒价的测定及疫苗制备 | 第84页 |
| ·二价基因工程疫苗动物试验 | 第84页 |
| ·微量中和试验法检测中和抗体 | 第84-85页 |
| ·ELISA方法检测体液抗体 | 第85页 |
| ·淋巴细胞增殖效应试验 | 第85-86页 |
| ·外周血单核细胞的分离 | 第85页 |
| ·淋巴细胞增殖反应试验 | 第85-86页 |
| ·统计学方法 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-96页 |
| ·ORF2基因的PCR结果 | 第86页 |
| ·pIEORF2重组转移质粒的构建 | 第86-87页 |
| ·重组病毒的空斑筛选 | 第87页 |
| ·重组病毒在细胞上增殖滴度的测定 | 第87-88页 |
| ·重组病毒的Southern blotting鉴定 | 第88页 |
| ·重组病毒表达ORF2基因的Western blotting鉴定 | 第88-89页 |
| ·重组病毒表达ORF2基因的间接免疫荧光鉴定 | 第89-90页 |
| ·遗传稳定性评价 | 第90页 |
| ·重组病毒免疫猪的体液免疫反应测定 | 第90-95页 |
| ·伪狂犬病毒ELISA抗体测定 | 第90-91页 |
| ·伪狂犬病毒中和抗体测定 | 第91-92页 |
| ·PCV2 ELISA抗体检测 | 第92-94页 |
| ·PRV gE抗体ELISA检测 | 第94-95页 |
| ·重组病毒免疫猪的细胞免疫效应研究 | 第95-96页 |
| 第六章 讨论 | 第96-104页 |
| ·PCV2与猪圆环病毒病 | 第96-97页 |
| ·BVP22基因的PCR扩增 | 第97页 |
| ·兔抗ORF2高免血清的制备 | 第97页 |
| ·ORF2、BVP22基因的真核表达以及表达后的定位 | 第97-98页 |
| ·核酸疫苗的免疫效果 | 第98-99页 |
| ·BVP22蛋白转导的免疫增强效应 | 第99页 |
| ·"自杀性"DNA疫苗以及BVP22蛋白转导在"自杀性"DNA疫苗中的作用 | 第99-100页 |
| ·疫苗在防制PCV2感染中的作用 | 第100-101页 |
| ·伪狂犬病毒作为PCV2疫苗载体的优越性 | 第101页 |
| ·PCV2-PRV重组病毒的构建 | 第101-102页 |
| ·外源基因在伪狂犬病毒中的表达 | 第102页 |
| ·PCV2-PRV重组二价基因工程疫苗的免疫效果 | 第102-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 附录 | 第122页 |
