| 缩略语表 | 第1-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-25页 |
| 1. 乙型肝炎及其流行病学 | 第11-12页 |
| 2. 乙型肝炎病毒 | 第12-15页 |
| ·乙肝病毒发现史 | 第12页 |
| ·乙肝病毒的分子生物学特征 | 第12-14页 |
| ·HBV感染的机理 | 第14-15页 |
| 3. 乙肝表面抗原 | 第15-18页 |
| ·乙肝表面抗原的存在形式 | 第15-16页 |
| ·乙肝表面抗原的特征 | 第16-18页 |
| ·乙肝表面抗原的作用 | 第18页 |
| 4. 基因工程 HBsAg的制备 | 第18-22页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19页 |
| ·酵母表达系统 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第20-21页 |
| ·病毒表达系统 | 第21页 |
| ·植物表达系统 | 第21-22页 |
| 5. 立题背景及意义 | 第22-25页 |
| 第二章 乙肝表面抗原在毕赤酵母中的表达 | 第25-43页 |
| 1. 材料 | 第25-27页 |
| ·菌株和表达载体 | 第25页 |
| ·常用的材料与试剂 | 第25页 |
| ·主要试剂配方 | 第25-27页 |
| ·仪器和设备 | 第27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-34页 |
| ·病毒 DNA模板的获取 | 第27-28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28页 |
| ·PCR扩增 HBVS基因 | 第28-29页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第29页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·电转化酵母感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·真核表达载体的线性化 | 第31页 |
| ·真核表达载体的电转化 | 第31页 |
| ·重组酵母菌表型的筛选 | 第31-32页 |
| ·重组酵母菌的鉴定 | 第32-34页 |
| 3. 实验结果 | 第34-40页 |
| ·重组质粒的构建策略 | 第34页 |
| ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第36页 |
| ·重组质粒的线性化结果 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE分析表达结果 | 第37-38页 |
| ·Western-blot分析表达结果 | 第38-39页 |
| ·ELISA分析表达结果 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 乙肝表面抗原在原核表达系统(大肠杆菌)中的表达 | 第43-50页 |
| 1. 材料 | 第43-44页 |
| ·菌株和表达载体 | 第43页 |
| ·常用的材料与试剂 | 第43页 |
| ·主要试剂配方 | 第43-44页 |
| ·仪器和设备 | 第44页 |
| 2. 实验方法 | 第44-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第44页 |
| ·PCR扩增HBVS基因 | 第44页 |
| ·原核重组质粒pRSETBS的构建 | 第44页 |
| ·重组工程菌的构建和诱导表达 | 第44-45页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第45页 |
| 3. 实验结果 | 第45-49页 |
| ·重组质粒的构建策略 | 第45-46页 |
| ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pRSETBS的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE分析表达结果 | 第48页 |
| ·Western-blot分析表达结果 | 第48-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 毕赤酵母表达乙肝表面抗原的纯化及应用 | 第50-62页 |
| 1. 材料 | 第50-51页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·常用的材料与试剂 | 第50页 |
| ·主要试剂配方 | 第50-51页 |
| ·仪器和设备 | 第51页 |
| 2. 实验方法 | 第51-54页 |
| ·GS115-pPICZS最佳收获时间的确定 | 第51页 |
| ·GS115-pPICZS表达量的粗略确定 | 第51页 |
| ·GS115-pPICZS大量诱导表达 | 第51-52页 |
| ·Ni-NTA亲和层析纯化 | 第52-53页 |
| ·SDS-RAGE后银染分析 | 第53页 |
| ·Western-blot分析纯化后蛋白的活性 | 第53页 |
| ·Bradford法测纯化后蛋白的浓度 | 第53页 |
| ·纯化蛋白的应用 | 第53-54页 |
| 3. 实验结果 | 第54-60页 |
| ·最佳收获时间的确定 | 第54-55页 |
| ·表达量的粗略估算 | 第55页 |
| ·银染分析 Ni-NTA 纯化的目的蛋白 | 第55-57页 |
| ·Western-blot分析纯化蛋白 | 第57-58页 |
| ·Bradford法测纯化蛋白的浓度 | 第58页 |
| ·纯化蛋白的应用 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |