| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 引言 | 第15-20页 |
| 第一部分 综述 | 第20-40页 |
| 第一章 传染性法氏囊病病毒的分子生物学基础 | 第20-30页 |
| 1 IBDV的基因组结构及编码的蛋白 | 第20-25页 |
| ·5’-NCR和3’-NCR | 第21-22页 |
| ·病毒的蛋白 | 第22-25页 |
| ·VP1蛋白 | 第22-23页 |
| ·VP2蛋白 | 第23-24页 |
| ·VP3蛋白 | 第24页 |
| ·VP4蛋白 | 第24-25页 |
| ·VP5蛋白 | 第25页 |
| 2 IBDV的形态和结构 | 第25-26页 |
| 3 IBDV抗原与毒力变异的分子机制 | 第26-29页 |
| 4 IBDV的复制和繁殖 | 第29-30页 |
| 第二章 动物DSRNA病毒的反向遗传系统 | 第30-40页 |
| 1 动物dsRNA病毒科的反向遗传 | 第31-36页 |
| ·dsRNA病毒科反向遗传系统的建立 | 第31-33页 |
| ·反向遗传系统在dsRNA病毒科病毒研究中的应用 | 第33-34页 |
| ·反向遗传系统对dsRNA病毒科病毒VP5蛋白研究的意义 | 第34-36页 |
| 2 呼肠孤病毒科(Reoviridae)的反向遗传 | 第36-38页 |
| ·呼肠孤病毒科反向遗传的探索 | 第37页 |
| ·S2基因末端序列对呼肠孤病毒科复制的意义 | 第37-38页 |
| 3 展望 | 第38-40页 |
| 第二部分 研究内容 | 第40-99页 |
| 第三章 基因组节段杂合传染性法氏囊病病毒的构建—基于易感动物 | 第40-56页 |
| 1 材料和方法 | 第41-49页 |
| ·内切酶和试剂 | 第41页 |
| ·定向克隆 | 第41-44页 |
| ·IBDV ZJ2000株基因组A节段定点突变引入NaeI酶切位点 | 第44-45页 |
| ·含有突变A节段的真核表达载体的构建 | 第45页 |
| ·转染级高纯质粒的制备及动物实验 | 第45-46页 |
| ·Lipofectamine复合物制备及动物实验 | 第46-47页 |
| ·ELISA血清抗体的检测 | 第47-48页 |
| ·法氏囊的病理组织学观察 | 第48页 |
| ·琼脂免疫扩散试验检测IBDV抗原和电镜观察病毒粒子 | 第48页 |
| ·杂合病毒的鸡胚增殖试验 | 第48页 |
| ·杂合病毒基因组抽提 | 第48-49页 |
| ·Long-accurate RT-PCR扩增基因组并酶切鉴定 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-54页 |
| ·含有分子标记的基因组A节段真核表载体的构建 | 第49页 |
| ·共注射感染性克隆，诱导了高效价的抗IBDV血清抗体 | 第49-50页 |
| ·临床观察和法氏囊病理组织学检查 | 第50页 |
| ·IBDV抗原检测和IBDV病毒样粒子观察 | 第50-51页 |
| ·杂合病毒的鸡胚感染实验 | 第51-53页 |
| ·杂合病毒基因组分子标记的鉴定 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 传染性法氏囊病病毒VP5基因的原核表达及多克隆抗体制备 | 第56-65页 |
| 1 材料和方法 | 第57-60页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·病毒增殖及基因组RNA的抽提 | 第58页 |
| ·VP5基因的RT-PCR扩增和原核表达载体的构建 | 第58页 |
| ·VP5蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第58-59页 |
| ·GST-VP5融合蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| ·免疫印迹(western blot) | 第58-59页 |
| ·GST-VP5融合蛋白的纯化 | 第59页 |
| ·兔抗VP5蛋白多克隆抗体的制备 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-63页 |
| ·IBDV TL2004株VP5基因原核表达载体的构建和序列分析 | 第60-61页 |
| ·VP5蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第61-62页 |
| ·兔抗VP5蛋白多克隆抗体鉴定和效价测定 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 传染性法氏囊病病毒HZ2株VP5基因缺失株的构建 | 第65-84页 |
| 1 材料与方法 | 第66-71页 |
| ·病毒、质粒与细胞培养 | 第66-67页 |
| ·试剂与引物 | 第67页 |
| ·过渡载体pGEX-4T-2-A／HZ2的构建 | 第67页 |
| ·感染性克隆突变体的构建(Fig.1) | 第67页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第67-68页 |
| ·共转染与“病毒传代” | 第68-69页 |
| ·间接免疫荧光检测病毒结构蛋白和非结构蛋白 | 第69-71页 |
| ·电子显微镜观察病毒样粒子 | 第71页 |
| ·RT-PCR扩增病毒基因组RNA和分子标记鉴定 | 第71页 |
| ·50％细胞感染量(TCID50)滴定试验 | 第71页 |
| ·生长曲线试验 | 第71页 |
| ·ELISA半定量病毒结构蛋白表达 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-79页 |
| ·pGEX-A／HZ2的构建 | 第71-72页 |
| ·感染性克隆突变体的构建 | 第72-74页 |
| ·细胞病变的观察与病毒“感染” | 第74-75页 |
| ·间接免疫荧光试验显示VP5蛋白不被表达 | 第75页 |
| ·电子显微镜观察病毒样粒子 | 第75-76页 |
| ·RT-PCR扩增病毒基因组RNA和分子标记鉴定 | 第76-78页 |
| ·生长曲线 | 第78-79页 |
| ·ELISA法检测病毒蛋白表达动态 | 第79页 |
| 3 讨论 | 第79-84页 |
| 第六章 传染性法氏囊病病毒ANHE2株的感染性和免疫原性研究 | 第84-96页 |
| 1 材料 | 第85页 |
| ·SPF来航鸡胚和SPF来航鸡 | 第85页 |
| ·免疫用IBDV病毒株 | 第85页 |
| ·IBDV标准强毒株 | 第85页 |
| ·病毒血清中和试验用毒株 | 第85页 |
| 2 方法 | 第85-88页 |
| ·IBDV ANhe2株在SPF鸡体内的复制特性 | 第85-86页 |
| ·动物分组及病毒接种 | 第85-86页 |
| ·囊／体比值计算 | 第86页 |
| ·法氏囊病理解剖学和病理组织学检查 | 第86页 |
| ·病毒分离和滴定 | 第86页 |
| ·分离病毒的遗传标记检测 | 第86页 |
| ·IBDV ANhe2株的免疫特性 | 第86-88页 |
| ·动物分组 | 第86-87页 |
| ·血清ELISA抗体检测 | 第87页 |
| ·血清中和抗体检测(固定病毒稀释血清法) | 第87页 |
| ·法氏囊病理学观察及统计学分析 | 第87-88页 |
| 3 结果 | 第88-93页 |
| ·VP5的缺失对IBDV ANhe2株在SPF鸡体内复制的影响 | 第88-91页 |
| ·法氏囊病理解剖学和病理组织学检查 | 第88-89页 |
| ·病毒在法氏囊中的感染曲线 | 第89-90页 |
| ·病毒在法氏囊中复制的遗传稳定性 | 第90-91页 |
| ·VP5的缺失对IBDV ANhe2株诱导机体保护性免疫的影响 | 第91-93页 |
| ·攻毒保护试验 | 第91-93页 |
| ·血清抗体的检测 | 第93页 |
| 4 讨论 | 第93-96页 |
| 第七章 总结和展望 | 第96-99页 |
| 1 主要结论与创新点 | 第96-97页 |
| 2 展望与不足 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 第三部分 附录 | 第110-113页 |
| 独创性声明 | 第113页 |
