| 论文独创性声明 | 第1页 |
| 关于论文使用授权的声明 | 第3-4页 |
| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写词表 | 第7-11页 |
| 文献综述 | 第11-21页 |
| 概述 | 第11页 |
| 1 IL-6的分子结构 | 第11-13页 |
| 2 IL-6受体结构及特征 | 第13-14页 |
| ·IL-6Ra的结构与功能 | 第13-14页 |
| ·gp130的结构与功能 | 第14页 |
| 3 IL-6的作用机理 | 第14-15页 |
| 4 IL-6生物学功能 | 第15-16页 |
| ·诱导分化和基因表达,参与免疫调节作用 | 第15-16页 |
| ·刺激细胞生长 | 第16页 |
| ·细胞生长抑制作用 | 第16页 |
| 5 IL—6的应用进展 | 第16-19页 |
| ·IL-6在人医上的应用进展 | 第16-18页 |
| ·IL-6在兽医生产上的应用进展 | 第18-19页 |
| 6 小结 | 第19-21页 |
| 试验部分 | 第21-43页 |
| 第一章 荣昌猪白细胞介素6基因的克隆与序列分析 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·试验动物 | 第21页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第22页 |
| ·质粒大量提取所用溶液 | 第22页 |
| ·细胞培养用液 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| ·荣昌猪外周血淋巴细胞的分离、培养及白细胞介素6的诱生 | 第23-24页 |
| ·荣昌猪外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第24页 |
| ·荣昌猪白细胞介素6基因的RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·RT-PCR | 第24-25页 |
| ·白细胞介素-6基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5a的制备 | 第25-26页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第26页 |
| ·连接转化 | 第26页 |
| ·PIL-6质粒鉴定 | 第26-28页 |
| ·PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·酶切鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第27-28页 |
| ·荣昌猪白细胞介素6基因生物信息学分析 | 第28页 |
| ·PIL-6基因多重序列比较分析 | 第28页 |
| ·PIL-6核苷酸序列同源性比较与分析 | 第28页 |
| ·PIL-6基因的核苷酸序列的翻译 | 第28页 |
| ·PIL-6编码氨基酸序列比较 | 第28页 |
| ·PIL-6蛋白质氨基酸序列亲水性、抗原性和表面可能性分析 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-31页 |
| ·PIL-6 PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第29-30页 |
| ·荣昌猪白细胞介素6基因生物信息学分析 | 第30-31页 |
| ·PIL-6基因多重序列比较分析结果 | 第30页 |
| ·PIL-6核苷酸序列同源性比较与分析结果 | 第30-31页 |
| ·PIL-6基因的核苷酸序列的翻译的氨基酸序列 | 第31页 |
| ·PIL-6氨基酸序列比较结果 | 第31页 |
| ·PIL-6蛋白质氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可能性分析结果 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 荣昌猪白细胞介素6的原核表达及其生物活性检测 | 第33-43页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·包涵体提取与洗涤所用溶液 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·质粒的提取： | 第34-35页 |
| ·PET-32a(+)和PIL-6基因片段的连接反应 | 第35页 |
| ·原核表达质粒PET-32a(+)-RIL-6转化表达菌BL21 | 第35页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6双酶切鉴定 | 第35页 |
| ·大肠杆菌的表达诱导 | 第35-36页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6表达鉴定 | 第36页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6重组表达产物生物学活性的测定 | 第36-37页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6融合表达蛋白的洗涤 | 第36页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6蛋白含量的测定 | 第36页 |
| ·重组表达产物生物学活性测定 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| ·重组表达质粒PET-32a(+)-RIL-6的构建与鉴定 | 第37页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·PET-32a(+)-RIL-6表达鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的表达量分析 | 第39-40页 |
| ·重组猪IL-6的生物学活性检测结果 | 第40-41页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·重组猪IL-6的生物学活性检测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·关于猪IL-6的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·关于IL—6的活性检测 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 附录一 | 第45-49页 |
| 附录二 | 第49-51页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
