| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 第一部分 实时荧光 PCR 检测肠出血性大肠杆菌 0157 的研究 | 第14-62页 |
| 1 引言 | 第14-25页 |
| ·实时荧光PCR 应用的荧光探针技术 | 第15-19页 |
| ·分子信标 | 第15-16页 |
| ·TaqMan 探针或水解探针 | 第16-17页 |
| ·杂交探针 | 第17-18页 |
| ·双链荧光探针 | 第18页 |
| ·荧光标记引物 | 第18-19页 |
| ·SYBR Green I 荧光染料 | 第19页 |
| ·实时荧光PCR 在临床检测上的应用 | 第19-22页 |
| ·肠出血性大肠杆菌0157 的研究 | 第22-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·引物和Y 型荧光探针的设计与合成 | 第26-28页 |
| ·检测rbf E 基因的引物和Y 型荧光探针的设计合成 | 第26页 |
| ·茎、尾长度不同的Y 型荧光探针的设计合成 | 第26-27页 |
| ·生物素探针捕获实验设计 | 第27-28页 |
| ·其他毒力基因的设计合成 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·常用溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·模板准备 | 第30页 |
| ·rbf E 基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·Y 型荧光探针的熔解曲线 | 第31页 |
| ·不同荧光探针的熔解曲线 | 第31-32页 |
| ·Y 型荧光探针的特异性实验 | 第32-33页 |
| ·荧光探针的灵敏度实验 | 第33页 |
| ·其它实验 | 第33-34页 |
| ·电泳检测 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-45页 |
| ·普通PCR 对rbf E 基因片段的扩增结果 | 第35页 |
| ·Y 型荧光探针的反应原理 | 第35-37页 |
| ·Y 型荧光探针的熔解曲线 | 第37-38页 |
| ·不同荧光探针的熔解曲线 | 第38页 |
| ·Y 型荧光探针特异性实验结果 | 第38-41页 |
| ·Y 型荧光探针与合成靶序列的变温反应 | 第38-39页 |
| ·实时荧光PCR 反应检测样品的结果 | 第39-41页 |
| ·Y 型荧光探针灵敏度实验结果 | 第41页 |
| ·磁珠捕获实验结果 | 第41-42页 |
| ·多重PCR 反应实验结果 | 第42-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-50页 |
| ·Y 型荧光探针的作用原理 | 第45-46页 |
| ·Y 型荧光探针的优化 | 第46-47页 |
| ·检测肠出血性大肠杆菌0157 的实时荧光PCR 体系 | 第47-48页 |
| ·磁珠捕获体系和多重PCR 体系的建立 | 第48-49页 |
| ·待解决的问题 | 第49-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-62页 |
| 第二部分 实时荧光 PCR 检测禽流感 H5 亚型的研究 | 第62-93页 |
| 1 引言 | 第62-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-74页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·引物与荧光探针的设计与合成 | 第66-67页 |
| ·常用溶液的配制 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-74页 |
| ·禽流感病毒RNA 的提取 | 第67-68页 |
| ·病毒RNA 的反转录 | 第68页 |
| ·HA 基因的克隆 | 第68-69页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第69-70页 |
| ·DNA 连接反应 | 第70页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第70页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第70页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第70-71页 |
| ·Y 型荧光探针的特异性实验 | 第71-72页 |
| ·反转录－实时荧光PCR 体系的建立 | 第72-73页 |
| ·Y 型荧光探针检测病毒RNA 特异性实验 | 第73页 |
| ·Y 型荧光探针检测病毒RNA 灵敏度实验 | 第73-74页 |
| 3 结果 | 第74-84页 |
| ·病毒RNA 反转录PCR 扩增的结果 | 第74页 |
| ·pMD18-HA 质粒的构建 | 第74-76页 |
| ·Y 型荧光探针的特异性实验 | 第76-77页 |
| ·与靶序列的变温曲线实验 | 第76页 |
| ·实时荧光PCR 检测pMD18-HA 实验 | 第76-77页 |
| ·Y 型荧光探针检测病毒RNA 体系的优化 | 第77-82页 |
| ·Y 型荧光探针检测H5 亚型禽流感病毒RNA 的特异性实验. | 第82页 |
| ·Y 型荧光探针检测病毒RNA 灵敏度的实验 | 第82-84页 |
| 4. 讨论 | 第84-87页 |
| 小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 附录 | 第93-94页 |
| 硕士期间获得奖励 | 第93页 |
| 硕士期间发表文章 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
