| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-24页 |
| 1．1 猪MHC的研究进展 | 第9-20页 |
| 1．1．1 SLA基因结构 | 第10-13页 |
| 1．1．1．1 SLAⅠ类基因 | 第10-11页 |
| 1．1．1．2 SLAⅡ类基因 | 第11-13页 |
| 1．1．1．3 SLAⅢ类基因 | 第13页 |
| 1．1．2 SLA基因的遗传特点 | 第13-14页 |
| 1．1．3 SLA的分型方法 | 第14-16页 |
| 1．1．3．1 传统的分型方法 | 第15页 |
| 1．1．3．2 以分子技术为基础分型方法 | 第15-16页 |
| 1．1．4 MHC的功能 | 第16-18页 |
| 1．1．5 MHC在异种移植中的作用 | 第18-20页 |
| 1．2 器官异种移植 | 第20-24页 |
| 1．2．1 异种移植简介 | 第20-21页 |
| 1．2．2 异种移植存在的问题及前景展望 | 第21-24页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-33页 |
| 3．1 材料 | 第25-27页 |
| 3．1．1 样品 | 第25页 |
| 3．1．1．1 DNA样品 | 第25页 |
| 3．1．1．2 组织样品 | 第25页 |
| 3．1．2 培养基、酶及试剂盒 | 第25页 |
| 3．1．3 菌株 | 第25页 |
| 3．1．4 主要试剂及配制 | 第25-27页 |
| 3．1．4．1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3．1．4．2 其它试剂的配制 | 第26-27页 |
| 3．1．5 主要仪器设备 | 第27页 |
| 3．1．6 主要分子生物学软件 | 第27页 |
| 3．2 方法 | 第27-33页 |
| 3．2．1 五指山小型猪SLA-DQ基因的SNPs检测与分型方法 | 第27-30页 |
| 3．2．1．1 用于基因分离的引物设计方法 | 第27页 |
| 3．2．1．2 PCR扩增条件 | 第27-28页 |
| 3．2．1．3 PCR-SSCP检测 | 第28页 |
| 3．2．1．4 PCR产物的纯化、克隆和测序 | 第28-30页 |
| 3．2．1．5 DNA序列同源性检索鉴定 | 第30页 |
| 3．2．1．6 基因分型 | 第30页 |
| 3．2．1．7 分型引物的设计 | 第30页 |
| 3．2．1．8 分型结果检测 | 第30页 |
| 3．2．1．9 SLA-DQA,DQB多肽结合区抗原性及疏水性分析 | 第30页 |
| 3．2．2 五指山小型猪SLAⅠ类基因中SLA-1,2基因多肽结合区(第2及第3外显子)的SNPs检测 | 第30-33页 |
| 3．2．2．1 用RT-PCR方法扩增SLAⅠ类基因SLA-1,2 cDNA片段 | 第30-31页 |
| 3．2．2．2 总RNA提取及质量检测 | 第31页 |
| 3．2．2．3 RNA的反转录(Reverse transcription RT) | 第31页 |
| 3．2．2．4 PCR反应 | 第31-32页 |
| 3．2．2．5 扩增产物的回收、克隆和测序 | 第32页 |
| 3．2．2．6 核苷酸序列分析 | 第32页 |
| 3．2．2．7 五指山猪与人MHCⅠ类基因多态结合区氨基酸的比较分析 | 第32页 |
| 3．2．2．8 经典的SLAⅠ类基因与HLAⅠ类基因自然杀伤细胞KIRs结合区相应氨基酸的比较分析 | 第32-33页 |
| 4 结果 | 第33-45页 |
| 4．1 SLA-DQA多态性检测与分型结果 | 第33-35页 |
| 4．1．1 SLA-DQA基因的分离 | 第33页 |
| 4．1．2 SLA-DQA的多态性检测 | 第33-34页 |
| 4．1．3 SLA-DQA测序结果 | 第34页 |
| 4．1．4 SLA-DQA的分型 | 第34-35页 |
| 4．2 五指山小型猪SLA-DQB的多态性检测 | 第35-37页 |
| 4．2．1 SLA-DQB基因的分离 | 第35页 |
| 4．2．2 SLA-DQB多态性检测 | 第35-36页 |
| 4．2．3 SLA-DQB基因的克隆测序结果 | 第36页 |
| 4．2．4 SLA-DQA,DQB多肽结合区的抗原性及疏水性分析 | 第36-37页 |
| 4．3 五指山小型猪经典的SLAⅠ类基因(SLA-1,SLA-2)的多态性检测与遗传方式分析结果 | 第37-45页 |
| 4．3．1 五指山小型猪SLA-1基因的多态性检测与遗传方式分析 | 第37-40页 |
| 4．3．1．1 RNA质量检测结果 | 第37-38页 |
| 4．3．1．2 SLA-1基因的分离 | 第38页 |
| 4．3．1．3 SLA-1基因的克隆测序结果 | 第38-40页 |
| 4．3．2 SLA-2基因多态性检测与遗传方式分析 | 第40-42页 |
| 4．3．2．1 SLA-2基因的分离 | 第40页 |
| 4．3．2．2 SLA-2基因的克隆测序 | 第40-41页 |
| 4．3．2．3 SLAⅠ类基因品种内系统树分析结果 | 第41-42页 |
| 4．3．3 五指山小型猪SLAⅠ类基因与人HLAⅠ类基因多态结合区氨基酸的比较分析 | 第42-43页 |
| 4．3．4 SLAⅠ类基因与HLAⅠ类基因NK细胞杀伤抑制受体结合区重要氨基酸的比较分析 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-50页 |
| 5．1 关于基因的分离 | 第45-46页 |
| 5．2 关于SNP检测 | 第46-47页 |
| 5．3 关于系统发生树 | 第47页 |
| 5．4 关于AS-PCR分型 | 第47-48页 |
| 5．5 关于五指山猪与人MHCⅠ类基因多肽结合区氨基酸的比较分析 | 第48页 |
| 5．6 关于SLAⅠ类基因与HLAⅠ类基因NK细胞杀伤抑制受体结合区重要氨基酸的比较分析 | 第48-50页 |
| 6 小结 | 第50-52页 |
| 6．1 本研究获得的成果 | 第50页 |
| 6．2 本研究的创新点与特色 | 第50-51页 |
| 6．3 本研究的不足之处与对下一步研究的建议 | 第51-52页 |
| 6．3．1 本研究的不足之处 | 第51页 |
| 6．3．2 下一步研究的建议 | 第51-52页 |
| 缩略词表 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
