| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 第一部分 发根农杆菌介导牛膝转化及转化体齐墩果酸含量分析 | 第12-49页 |
| 一 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 植物遗传转化研究概况 | 第12-15页 |
| 1．1 载体介导的转化法 | 第12-13页 |
| 1．2 直接基因转化 | 第13-15页 |
| 1．2．1 电击法 | 第13页 |
| 1．2．2 基因枪法 | 第13-14页 |
| 1．2．3 花粉管通道法 | 第14页 |
| 1．2．4 多聚物介导法 | 第14-15页 |
| 2 农杆菌介导的遗传转化 | 第15-19页 |
| 2．1 农杆菌转化机理 | 第15-16页 |
| 2．2 农杆菌感染转化能力 | 第16-17页 |
| 2．3 转化载体构建及特点 | 第17-18页 |
| 2．4 农杆菌介导的基因转移 | 第18-19页 |
| 3 发根农杆菌介导的植物遗传转化 | 第19-24页 |
| 3．1 Ri质粒的特性 | 第19-20页 |
| 3．2 Ri质粒转化毛状根的特点 | 第20页 |
| 3．3 发根农杆菌 Ri质粒的应用 | 第20-24页 |
| 4 本实验研究目的和意义 | 第24页 |
| 二 研究材料和方法 | 第24-29页 |
| 1 怀牛膝组织培养和植株再生 | 第24-25页 |
| 1．1 无菌苗的获得 | 第24-25页 |
| 1．2 愈伤组织的诱导和植株再生 | 第25页 |
| 2 发根农杆菌对牛膝再生苗的转化 | 第25-26页 |
| 2．1 发根农杆菌菌株 | 第25页 |
| 2．2 受体材料 | 第25页 |
| 2．3 外植体的转化 | 第25-26页 |
| 2．4 转化毛状根根系的建立 | 第26页 |
| 3 毛状根优质株系的筛选 | 第26页 |
| 4 毛状根液体培养基的优化 | 第26页 |
| 5 毛状根生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| 6 毛状根的鉴定 | 第27页 |
| 6．1 甘露碱的检测 | 第27页 |
| 6．2 PCR检测 | 第27页 |
| 7 毛状根中齐墩果酸的测定 | 第27-29页 |
| 7．1 齐墩果酸的薄层分析 | 第27-28页 |
| 7．2 齐墩果酸的HPLC测定 | 第28-29页 |
| 7．2．1 仪器和色谱条件 | 第28页 |
| 7．2．2 标准曲线的绘制 | 第28页 |
| 7．2．3 样品的制备 | 第28-29页 |
| 7．2．4 齐墩果酸的含量 | 第29页 |
| 8 毛状根愈伤组织的诱导和植株再生 | 第29页 |
| 三 结果和分析 | 第29-39页 |
| 1 牛膝组织培养和植株再生 | 第29-32页 |
| 1．1 愈伤组织的诱导 | 第29-30页 |
| 1．2 不同植物激素组合对苗的分化的影响 | 第30-31页 |
| 1．3 根的分化 | 第31-32页 |
| 2 毛状根转化系的获得 | 第32-34页 |
| 3 毛状根优质株系的筛选 | 第34页 |
| 4 毛状根的液体培养 | 第34页 |
| 5 毛状根生长速率测定 | 第34-35页 |
| 6 诱导毛状根再生植株 | 第35-36页 |
| 7 毛状根 rolB基因的PCR扩增 | 第36页 |
| 8 毛状根甘露碱的纸电泳分析鉴定 | 第36-37页 |
| 9 毛状根中齐墩果酸的定性测定 | 第37-38页 |
| 10 毛状根中齐墩果酸的含量 | 第38-39页 |
| 四 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-49页 |
| 第二部分 农杆菌介导内抑素基因转化番茄的研究 | 第49-59页 |
| 一 前言 | 第49页 |
| 二 材料与方法 | 第49-52页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| 1．1 质粒、菌株 | 第50页 |
| 1．2 番茄材料 | 第50页 |
| 1．3 试剂 | 第50页 |
| 1．4 主要仪器设备 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| 2．1 番茄组织培养再生体系的建立 | 第50-51页 |
| 2．1．1 无菌苗的培养 | 第50页 |
| 2．1．2 愈伤组织的诱导和不定芽的分化 | 第50-51页 |
| 2．1．3 小苗的生根与移栽 | 第51页 |
| 2．2 用于转化的农杆菌菌液的制备 | 第51页 |
| 2．3 叶盘法转化番茄 | 第51页 |
| 2．4 GUS酶活性检测 | 第51-52页 |
| 2．5 再生植株的 PCR检测 | 第52页 |
| 2．6 总 RNA提取 | 第52页 |
| 2．7 再生植株的 RT-PCR检测 | 第52页 |
| 三 结果和分析 | 第52-56页 |
| 1 番茄再生体系的建立 | 第53页 |
| 2 番茄遗传转化体系的建立 | 第53-54页 |
| 3 GUS基因表达检测 | 第54-55页 |
| 4 转化体的 PCR鉴定 | 第55页 |
| 5 转化体的RT-PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 6 乙酰丁香酮(AS)对转化的影响 | 第56页 |
| 四 结果和分析 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 第三部分 霸王组织培养和再生植株的 RAPD分析 | 第59-74页 |
| 一 前言 | 第59页 |
| 二 研究材料和方法 | 第59-62页 |
| 1 实验材料 | 第59-60页 |
| 2 愈伤组织的诱导和继代培养 | 第60页 |
| 3 苗的分化 | 第60页 |
| 4 根的分化 | 第60页 |
| 5 炼苗与移栽 | 第60-61页 |
| 6 再生苗的扦插生根及繁殖 | 第61页 |
| 7 再生植株的细胞学观察 | 第61页 |
| 8 再生植株的 RAPD分析 | 第61页 |
| 9 RAPD条件优化 | 第61-62页 |
| 三 结果和讨论 | 第62-71页 |
| 1 不同激素组合对愈伤组织诱导的影响 | 第62-63页 |
| 2 苗的分化及不同植物激素组合对苗形成的影响 | 第63-64页 |
| 3 根的分化和植株的移栽 | 第64-65页 |
| 4 再生植株的细胞学观察 | 第65-66页 |
| 5 基因组 DNA的提取及 RAPD分析 | 第66-67页 |
| 6 反应因子对 RAPD反应的影响 | 第67-71页 |
| 6．1 Mg~2+浓度对 RAPD反应影响 | 第67-68页 |
| 6．2 dNTPs浓度对 RAPD反应影响 | 第68页 |
| 6．3 Taq DNA聚合酶浓度对 RAPD反应影响 | 第68-70页 |
| 6．4 引物浓度对 RAPD反应影响 | 第70页 |
| 6．5 模板 DNA用量对 RAPD反应影响 | 第70-71页 |
| 四 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |