| 摘要 | 第1-12页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 正文 | 第15-108页 |
| 第一部分 细胞内钾离子浓度对NF-κB /DNA 结合能力的影响调节促凋亡蛋白的转录,参与血清剥夺造成的神经细胞凋亡 | 第15-75页 |
| 第一章 引言 | 第16-33页 |
| 第一节 当前细胞凋亡的研究进展 | 第16-27页 |
| 第二节 细胞内钾离子稳态与细胞凋亡 | 第27-30页 |
| 第三节 研究假说与创新 | 第30-33页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第33-43页 |
| 第一节 实验材料 | 第33-35页 |
| 第二节 实验方法 | 第35-43页 |
| ·)皮层神经元原代培养 | 第35页 |
| ·)HEK 293 细胞系培养 | 第35-37页 |
| ·)神经细胞内钾离子浓度变化的监测 | 第37页 |
| ·)凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assays) | 第37-38页 |
| ·)蛋白免疫印迹实验(Western blotting) | 第38页 |
| ·)免疫细胞化学(Immnocytochemistry)及Hoechst 核染色 | 第38-39页 |
| ·)染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第39-40页 |
| ·)PI 活细胞排斥染色 | 第40页 |
| ·)NF-κB 重组蛋白的原核表达和纯化 | 第40-41页 |
| ·)κB-luciferase 报告基因的表达检测 | 第41页 |
| ·)反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第41-42页 |
| ·)MTT 细胞活性检测 | 第42页 |
| ·)RNA 干扰(RNA interference,RNAi) | 第42-43页 |
| ·)统计与检验 | 第43页 |
| 第三章研究结果 | 第43-66页 |
| 第一节 去血清处理激活神经元NF-κB 活性 | 第43-49页 |
| 第二节 去血清激活的NF-κB 活性不会被TEA 阻断 | 第49页 |
| 第三节 TEA 阻断去血清引起的NF-κB 调节基因的表达 | 第49-50页 |
| 第四节 TEA 对NF-κB 调节基因上调的抑制作用不依赖于细胞膜去极化引起的钙内流和蛋白激酶A 的激活 | 第50-52页 |
| 第五节 TEA 抑制去血清引起的κB-luciferase 的表达,此作用不依赖于钙内流和PKA 激活 | 第52页 |
| 第六节 HEK 293 细胞内钾浓度的升高抑制组成型NF-κB 的活性 | 第52-54页 |
| 第七节 离体实验证实钾离子浓度直接影响去血清诱导的神经元NF-κB 结合DNA 的活性 | 第54-57页 |
| 第八节 细胞内钾离子浓度的变化影响NF-κB 与下游基因启动子上结合位点的相互作用 | 第57-59页 |
| 第九节 钾离子浓度直接影响重组NF-κB 二聚体结合DNA 的活性 | 第59页 |
| 第十节 钾离子浓度不影响NF-κB 二聚体之间亚基的相互作用 | 第59页 |
| 第十一节 钾离子浓度选择性的影响转录因子与DNA 之间的相互作用 | 第59-62页 |
| 第十二节 RNAi p65 或RNAi Bcl-X 提高神经元在去血清处理时的成活率 | 第62-66页 |
| 第十三节 NF-κB 的抑制剂有与TEA 同样的保护神经元对抗去血清处理所致凋亡的能力 | 第66页 |
| 第四章 研究结果分析与结论 | 第66-72页 |
| 第一节 去血清激活的NF-κB 参与神经细胞凋亡 | 第66-68页 |
| 第二节 去血清引起的细胞内低钾调节NF-κB 的转录活性 | 第68-71页 |
| 第三节 细胞内低钾对NF-κB转录活性的调节是通过钾离子对NF-κB/DNA结合的直接的特异的作用 | 第71-72页 |
| 第四节 结论 | 第72页 |
| 第五章 问题、思考和讨论 | 第72-75页 |
| 第二部分 神经回路活动依赖的蛋白激酶A 调节突触后Kv1.45e1229 磷酸化,可能参与神经活动对突触可塑性或神经活动依赖的神经元存活的调节 | 第75-108页 |
| 第一章 引言 | 第76-80页 |
| 第一节 神经回路活动与神经元凋亡的关系 | 第76-77页 |
| 第二节 钾通道磷酸化对其通道特性的影响 | 第77-79页 |
| 第三节 研究假说与创新 | 第79-80页 |
| 第二章实验材料与方法 | 第80-84页 |
| 第一节 实验材料 | 第80-81页 |
| 第二节 实验方法 | 第81-84页 |
| ·)皮层神经元原代培养 | 第81页 |
| ·)HEK 293 细胞系培养 | 第81页 |
| ·)myc-Kv1.4 质粒构建 | 第81-82页 |
| ·)PKA 磷酸化多肽或Kv1.4 的离体蛋白激酶磷酸化实验 | 第82-83页 |
| ·)多克隆抗体的制备 | 第83页 |
| ·)蛋白免疫印迹实验(Western blotting) | 第83页 |
| ·)免疫沉淀(Immunoprecipitation)及CIAP 蛋白去磷酸化实验 | 第83-84页 |
| ·)磷酸钙沉淀法或脂质体瞬时转染(Transient transfection) | 第84页 |
| ·)电生理(Electrophysiology) | 第84页 |
| ·)统计与检验 | 第84页 |
| 第三章研究结果 | 第84-98页 |
| 第一节 Kv1 家族高度保守的T1 区存在PKA 底物磷酸化位点的保守序列 | 第84-85页 |
| 第二节 离体实验证实PKA 磷酸化Kv1 家族T1 区的磷酸化位点 | 第85-88页 |
| 第三节 多克隆抗体特异性识别神经元中Kv1.4 的T1 区的Se1229 | 第88-90页 |
| 第四节 兴奋性神经递质谷氨酸受体NMDA 介导KV1.4 的Se1229 的磷酸化 | 第90-94页 |
| 第五节 神经回路递质传递激活突触后Kv1.4 的Se1229 磷酸化 | 第94-98页 |
| 第六节 PKA 特异性介导神经回路递质传递激活的突触后Kv1.4 的Se1229 磷酸化 | 第98页 |
| 第四章 研究结果分析与结论 | 第98-104页 |
| 第一节 神经元内KV1.4 的Se1229 被PKA 特异性磷酸化 | 第98-101页 |
| 第二节 神经回路活动引起的神经递质传递通过NMDA 受体进钙激活神经元Kv1.4 的Ser229 磷酸化 | 第101-102页 |
| 第三节 神经递质传递激活的PKA 磷酸化Kv1.4 的Se1229 | 第102-103页 |
| 第四节 结论 | 第103-104页 |
| 第五章 问题、思考和讨论 | 第104-108页 |
| 参考文献 | 第108-125页 |
| 发表文章目录 | 第125-126页 |
| 综述NF-κB 在中枢神经系统神经元凋亡中的作用 | 第126-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
