重组人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的表达、复性与纯化
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 引言 | 第10页 |
| 第一节 BMP-2的研究进展 | 第10-14页 |
| 1. BMPs的发现 | 第10-11页 |
| 2. BMP-2的性质 | 第11页 |
| 3. BMP-2的作用 | 第11-13页 |
| 4. BMP-2的制备 | 第13-14页 |
| 第二节包涵体复性研究进展 | 第14-20页 |
| 1. 引言 | 第14-15页 |
| 2. 包涵体的成因 | 第15-16页 |
| 3. 改善可溶性表达的常用策略 | 第16-17页 |
| 4. 包涵体的复性原理 | 第17-18页 |
| 5. 常用复性方法 | 第18-20页 |
| 第三节本文的研究思路 | 第20-22页 |
| 第二章 目的蛋白的表达 | 第22-33页 |
| 1. 引言 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-27页 |
| ·仪器与试剂 | 第23-24页 |
| ·工程菌的培养及诱导 | 第24页 |
| ·低温和低诱导强度时可溶性表达情况 | 第24-25页 |
| ·37℃不同诱导强度对目的蛋白表达量的影响 | 第25页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE检测 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的Western-blot检测方法 | 第26-27页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第27页 |
| 3. 结果: | 第27-30页 |
| ·生长曲线 | 第27页 |
| ·37℃时目的蛋白的表达 | 第27页 |
| ·19℃时低诱导强度下pBMP-2表达 | 第27页 |
| ·19℃时低诱导强度下pGEXBMP-2的表达 | 第27-28页 |
| ·IPTG对非融合目的蛋白表达量的影响 | 第28-30页 |
| 4. 讨论 | 第30-32页 |
| ·生长曲线的检测 | 第30-31页 |
| ·可溶性表达的检验 | 第31-32页 |
| ·比较两种表达载体 | 第32页 |
| ·关于优化IPTG的浓度 | 第32页 |
| 5. 结论 | 第32-33页 |
| 第三章 目的蛋白的透析法和稀释法复性 | 第33-37页 |
| 1. 引言 | 第33页 |
| 2. 材料与方法 | 第33-35页 |
| ·仪器与试剂 | 第33-34页 |
| ·包涵体的提取及粗纯 | 第34页 |
| ·溶解包涵体 | 第34页 |
| ·透析复性 | 第34页 |
| ·稀释复性 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35页 |
| ·透析复性 | 第35页 |
| ·稀释复性 | 第35页 |
| 4. 讨论 | 第35-36页 |
| ·包含体的粗纯 | 第35页 |
| ·包含体的溶解 | 第35-36页 |
| ·关于两种复性方法 | 第36页 |
| 5. 结论 | 第36-37页 |
| 第四章 羟基磷灰石柱上复性及同时纯化 | 第37-49页 |
| 1. 引言 | 第37-38页 |
| 2. 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·仪器与试剂 | 第38页 |
| ·装柱 | 第38页 |
| ·填料的选择 | 第38-39页 |
| ·上样方式的选择 | 第39页 |
| ·目的蛋白的洗脱及柱子的清洗 | 第39页 |
| ·溶菌酶的柱上复性 | 第39-41页 |
| ·HA对GSH/GSSG的吸附 | 第41页 |
| 3. 结果: | 第41-46页 |
| ·变性蛋白在不同填料上的表现 | 第41-42页 |
| ·上样方式的选择 | 第42页 |
| ·目的蛋白的洗脱 | 第42-43页 |
| ·溶菌酶的柱上复性: | 第43-45页 |
| ·HA对GSH/GSSG的吸附 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-48页 |
| ·目的蛋白柱上复性的可能原理 | 第46页 |
| ·上样条件优化的依据 | 第46-47页 |
| ·关于溶菌酶柱上复性 | 第47页 |
| ·HA对谷胱甘肽的吸附及其对溶菌酶氧化复性的影响 | 第47-48页 |
| 5. 结论 | 第48-49页 |
| 第五章 双体的形成、与单体的分离及活性检测 | 第49-56页 |
| 1. 引言 | 第49页 |
| 2. 材料与方法 | 第49-51页 |
| ·仪器与试剂 | 第49-50页 |
| ·温度和蛋白质浓度的影响 | 第50页 |
| ·pH值的影响 | 第50页 |
| ·GSSG、GSH比例对氧化的影响 | 第50页 |
| ·氧化产物的确证 | 第50页 |
| ·双体和单体的分离 | 第50页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第50-51页 |
| 3. 结果 | 第51-55页 |
| ·温度的影响 | 第51页 |
| ·蛋白浓度的影响 | 第51-52页 |
| ·pH的影响 | 第52页 |
| ·GSSG、GSH比例的影响 | 第52页 |
| ·氧化产物的确证: | 第52-54页 |
| ·双体和单体的分离: | 第54页 |
| ·活性的验证 | 第54-55页 |
| 4. 讨论: | 第55页 |
| ·氧化步骤的优化 | 第55页 |
| ·双体的形成 | 第55页 |
| 5. 结论 | 第55-56页 |
| 总结与展望 | 第56-57页 |
| 总结: | 第56页 |
| 展望: | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 申明 | 第63-64页 |
| 作者参与的科研工作、发表的文章及获得的奖励 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
