| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-19页 |
| 1 绪论 | 第19-45页 |
| ·高通量筛选是药物发现早期阶段的最好工具之一 | 第19-24页 |
| ·高通量筛选四要素 | 第20-21页 |
| ·高通量筛选策略 | 第21-24页 |
| ·高通量筛选基本方法简介 | 第24-33页 |
| ·荧光微体积数字图象测定技术 | 第24页 |
| ·荧光偏振 | 第24-25页 |
| ·竞争性ELISA测定 | 第25页 |
| ·闪烁邻近测定法 | 第25页 |
| ·共振能量转移 | 第25-26页 |
| ·均相时间分辨荧光 | 第26-27页 |
| ·载黑色素细胞测定法 | 第27页 |
| ·报告基因测定法 | 第27-28页 |
| ·钙离子测定法 | 第28页 |
| ·基于核磁共振(NMR)技术的筛选方法 | 第28-29页 |
| ·多道毛细管电泳 | 第29-30页 |
| ·大小排除色谱法 | 第30-31页 |
| ·过滤板法 | 第31页 |
| ·生物传感器 | 第31-32页 |
| ·基于MS的高通量筛选方法 | 第32-33页 |
| ·高通量药物筛选的药靶 | 第33-35页 |
| ·G-蛋白偶联受体的高通量药物筛选 | 第35-42页 |
| ·G蛋白偶联受体概述 | 第35-37页 |
| ·G蛋白偶联受体的药物筛选方法 | 第37-42页 |
| ·测定方法的选择及发展前景 | 第42页 |
| ·本文的研究内容 | 第42-45页 |
| 2 D1样受体及其激动剂筛选的意义、原理和技术路线 | 第45-67页 |
| ·D1样受体分布、结构与功能 | 第45-47页 |
| ·分布 | 第45-46页 |
| ·结构 | 第46页 |
| ·功能与药理学 | 第46-47页 |
| ·筛选D1样受体激动剂的重要意义 | 第47-63页 |
| ·D1样激动剂与Parkinson病的治疗 | 第47-52页 |
| ·D1激动剂与记忆的改善 | 第52-56页 |
| ·D1激动剂与药物成瘾的治疗 | 第56-63页 |
| ·D1样受体激动剂筛选的原理和技术路线 | 第63-67页 |
| 3 报告基因系统 | 第67-85页 |
| ·G-蛋白偶联受体的高通量筛选报告基因方法概述 | 第67-71页 |
| ·报告基因系统的组成 | 第67-71页 |
| ·报告基因系统的工作原理 | 第71页 |
| ·报告基因的构建 | 第71-78页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·结果 | 第74-78页 |
| ·报告基因系统的功能 | 第78-83页 |
| ·材料和方法 | 第78-79页 |
| ·结果 | 第79-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 4 D1样受体激动剂的筛选 | 第85-107页 |
| ·D1样受体的克隆 | 第85-88页 |
| ·D1受体的克隆 | 第85-87页 |
| ·D5受体的克隆 | 第87-88页 |
| ·D1激动剂药物筛选细胞模型的建立 | 第88-93页 |
| ·筛选细胞株的建立 | 第88-89页 |
| ·细胞模型的评估 | 第89-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| ·筛选条件的优化 | 第93-96页 |
| ·细胞数目对筛选的影响 | 第93-94页 |
| ·细胞与药物共孵时间对筛选的影响 | 第94页 |
| ·DMSO浓度对筛选的影响 | 第94-95页 |
| ·萤火虫荧光素酶底物的浓度对测试结果的影响 | 第95-96页 |
| ·D1 激动剂筛选方法的评估 | 第96-99页 |
| ·评估的原理和方法 | 第96-98页 |
| ·系统的稳定性评估 | 第98页 |
| ·筛选系统的Zˊ因子分析 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99页 |
| ·D1激动剂的筛选和活性物质的确认 | 第99-104页 |
| ·筛选的实施 | 第99-100页 |
| ·活性候选物的确认 | 第100-101页 |
| ·排除假阳性 | 第101-104页 |
| ·进一步确证 | 第104页 |
| ·讨论 | 第104-107页 |
| 5 D5受体的多态性,D5B和它的功能 | 第107-125页 |
| ·D5受体的多态性 | 第107-108页 |
| ·D5的多态性 | 第107-108页 |
| ·D5的假基因 | 第108页 |
| ·D5B的序列分析 | 第108-120页 |
| ·BLAST分析 | 第108-116页 |
| ·D5B、D5和D5一个假基因D5Ψ的序列对比 | 第116-117页 |
| ·D5B与D1-like受体的比较及功能分析 | 第117-120页 |
| ·D5B的功能 | 第120-123页 |
| ·报告基因方法评估D5B的功能 | 第120-122页 |
| ·cAMP测定 | 第122-123页 |
| ·讨论 | 第123-125页 |
| 6 klotho基因及其启动激活剂筛选的意义、原理和技术路线 | 第125-133页 |
| ·klotho基因及其功能 | 第125-129页 |
| ·klotho基因与衰老相关疾病 | 第125-126页 |
| ·klotho基因及其编码的蛋白 | 第126-127页 |
| ·klotho小鼠衰老表型可能的分子机机制 | 第127-129页 |
| ·体内调节klotho表达的重要意义 | 第129-131页 |
| ·Klotho蛋白的功能 | 第129-130页 |
| ·人的klotho基因与衰老相关的疾病 | 第130-131页 |
| ·klotho启动子激活剂筛选的原理和技术路线 | 第131-133页 |
| 7 klotho启动子激活剂的筛选 | 第133-149页 |
| ·klotho启动子的克隆 | 第133-137页 |
| ·klotho启动子的扫描分析 | 第133-134页 |
| ·klotho启动子的克隆 | 第134-137页 |
| ·筛选模型的建立 | 第137-140页 |
| ·建立稳定的细胞株 | 第137页 |
| ·建立衰老细胞模型 | 第137-139页 |
| ·讨论 | 第139-140页 |
| ·筛选条件的优化和筛选方法的评估 | 第140-142页 |
| ·细胞与药物和H2O2共孵时间对筛选的影响 | 第140页 |
| ·细胞数目和DMSO对筛选的影响 | 第140-141页 |
| ·筛选系统的评估 | 第141-142页 |
| ·klotho启动子激活剂的筛选和活性物质的确认 | 第142-146页 |
| ·筛选的实施 | 第142-144页 |
| ·激活剂的活性表征 | 第144-146页 |
| ·讨论 | 第146-149页 |
| 8 天然化合物的提取和活性物质的生物活性导向分离 | 第149-155页 |
| ·天然物提取和天然物库 | 第149-151页 |
| ·中药材的选择 | 第149页 |
| ·中药的提取和提取物库的建设 | 第149页 |
| ·讨论 | 第149-151页 |
| ·klotho启动子激活剂的生物活性导向分离 | 第151-155页 |
| ·药物活性的检测 | 第151页 |
| ·SBG530中活性成份的导向分离 | 第151-154页 |
| ·讨论 | 第154-155页 |
| 9 结论 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157-159页 |
| 参考文献 | 第159-181页 |
| 附图与附录 | 第181-197页 |