| 第一章 前言 | 第1-20页 |
| ·鱼类生长激素研究进展 | 第8-17页 |
| ·GH/PRL/SL 家族 | 第8页 |
| ·鱼类生长激素的分泌和调节 | 第8-9页 |
| ·鱼类生长激素的结构和生物学功能研究进展 | 第9-13页 |
| ·生长激素的分离 | 第9页 |
| ·生长激素的分子结构 | 第9-10页 |
| ·鱼类生长激素及其它生长激素的同源性比较 | 第10-11页 |
| ·生长激素对鱼类的作用 | 第11-13页 |
| ·生长激素的作用机理 | 第13-15页 |
| ·生长激素促进鱼类生长的生理机制 | 第13-14页 |
| ·生长激素受体(GHR)和生长激素结合蛋白(GHBP) | 第14页 |
| ·胰岛素样生长因子 I(IGF-I) | 第14-15页 |
| ·鱼类生长激素的活性检测方法 | 第15页 |
| ·鱼生长激素的基因工程研究进展 | 第15-17页 |
| ·转基因鱼的研究 | 第16页 |
| ·重组鱼类 GH 的研究 | 第16-17页 |
| ·本论文的背景，思路和技术路线 | 第17-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·材料 | 第20-23页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·主要药品和试剂 | 第20-21页 |
| ·试剂盒 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·常用缓冲液和溶液 | 第21-23页 |
| ·方法 | 第23-33页 |
| ·pcGH 基因的获得 | 第23-24页 |
| ·RT-PCR | 第23页 |
| ·RT-PCR 产物的亚克隆 | 第23-24页 |
| ·pcGH 的改造和克隆片断的制备 | 第24-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第24页 |
| ·凝胶电泳回收与纯化 PCR 产物 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的亚克隆 | 第25页 |
| ·质粒载体的制备和酶切 | 第25-26页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒及质粒的纯化 | 第25-26页 |
| ·目的基因与表达载体的酶切和纯化 | 第26页 |
| ·连接反应 | 第26-27页 |
| ·用氯化钙制备E. coli感受态细胞 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·转化子的鉴定 | 第28-29页 |
| ·SDS 碱裂解法小量制备质粒 DNA | 第28页 |
| ·重组质粒的酶切检测 | 第28-29页 |
| ·PCR 鉴定阳性重组子 | 第29页 |
| ·Sanger 双脱氧链终止法测序鉴定阳性重组子 | 第29页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第29-30页 |
| ·表达菌株的构建 | 第29页 |
| ·外源蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE 检测外源基因的表达 | 第29-30页 |
| ·质粒稳定性分析 | 第30页 |
| ·表达产物溶解性鉴定 | 第30-31页 |
| ·硫酸铵分级沉降 | 第31页 |
| ·阳离子交换层析 | 第31-32页 |
| ·周质蛋白的分离 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-55页 |
| ·最新克隆的大黄鱼生长激素基因的序列分析与比较 | 第33-35页 |
| ·pcGH 的胞内表达 | 第35-44页 |
| ·pcGH 基因的改造 | 第35-36页 |
| ·pcGH cDNA 基因两端的改造、引物设计 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增与亚克隆 | 第36页 |
| ·大肠杆菌表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·pET-22b(+)表达质粒 | 第37页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·pcGH 的胞内表达 | 第38-42页 |
| ·菌株的选择 | 第38-40页 |
| ·诱导表达条件的探索 | 第40-42页 |
| ·表达产物的分离与纯化 | 第42-44页 |
| ·细胞的破碎和外源蛋白的溶解性 | 第42-43页 |
| ·硫酸铵分级沉降 | 第43页 |
| ·离子交换层析纯化 | 第43-44页 |
| ·pcGH 的周质融合表达 | 第44-48页 |
| ·pcGH 的基因改造与亚克隆 | 第45-46页 |
| ·分泌表达质粒的构建 | 第46页 |
| ·周质型表达 | 第46-47页 |
| ·周质蛋白的分离 | 第47-48页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中表达的影响因素 | 第48-55页 |
| ·启动子和终止子 | 第48-49页 |
| ·SD 序列、起始密码子和终止密码子 | 第49-50页 |
| ·密码子的偏爱性 | 第50-51页 |
| ·外源蛋白对宿主的毒性 | 第51-53页 |
| ·外源蛋白的稳定性 | 第53页 |
| ·其他因素 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 1(克隆载体 pUCm-T 的物理图谱) | 第65-66页 |
| 附录 2(表达质粒 pET-22b(+)的物理图谱) | 第66-67页 |
| 附录 3(重组胞内表达质粒 pET-GH 的构建) | 第67-68页 |
| 附录 4(重组周质表达质粒 pET-GH2 的构建) | 第68-69页 |
| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第69页 |
