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重组人神经型一氧化氮合酶催化阿霉素单电子还原的研究

Abstract第1-8页
Abbreviations第8-10页
Introduction第10-26页
Materials第26-30页
 Enzymes第26页
 Chemicals第26页
 Plasmids第26-27页
 Apparatus第27页
 Medium第27页
 Buffers and other reagents第27-30页
Methods第30-49页
 PCR第30-32页
 Restriction and recovery of PCR products第32-34页
 Ligation第34页
 Preparation of competent cell第34-35页
 Transformation第35页
 Check of recombinant colony第35-37页
 Expression check with Western Blot第37-39页
 Protein expression第39页
 Protein purification第39-40页
 Construction of expression system of human nNOSs and CaM第40页
 Protein expression and purification of human nNOSs and CaM第40-44页
 Spectrophotometric methods第44-47页
 Stopped-flow spectroscopy第47-49页
Results第49-73页
 Construction of the expression system of human nNOS full-length enzyme第49-50页
 Expression and purification of human nNOS full-length enzyme第50-52页
 Purification of CaM and buman nNOS-s第52页
 Spectral characteristics of purified E.coli-Expressed enzyme第52-59页
 Reductase activities of E.coli-expressed human nNOS第59-63页
 Human neuronal nitric oxide synthase and its flavin domains catalyze one-electron reduction of Adriamycin, Mitomycin c, Menadione第63-66页
 The superoxide formation by Adriamycin radical第66-68页
 The flavin intermediates observed during the oxidation of the reduced enzymes by Adriamycin第68-73页
Discussion第73-79页
Reference第79-87页
List of publication第87-88页
Acknowledgments第88-89页
Appendix第89-93页
 cDNA sequence of human nitric oxide synthase第89-92页
 Amino acid sequence of nitric oxide synthase第92-93页
 Plasmid map of pBluscript SKⅠ(-)/human nNOS第93页
 Plasmid map of pCWori+第93页

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