Abstract | 第1-8页 |
Abbreviations | 第8-10页 |
Introduction | 第10-26页 |
Materials | 第26-30页 |
Enzymes | 第26页 |
Chemicals | 第26页 |
Plasmids | 第26-27页 |
Apparatus | 第27页 |
Medium | 第27页 |
Buffers and other reagents | 第27-30页 |
Methods | 第30-49页 |
PCR | 第30-32页 |
Restriction and recovery of PCR products | 第32-34页 |
Ligation | 第34页 |
Preparation of competent cell | 第34-35页 |
Transformation | 第35页 |
Check of recombinant colony | 第35-37页 |
Expression check with Western Blot | 第37-39页 |
Protein expression | 第39页 |
Protein purification | 第39-40页 |
Construction of expression system of human nNOSs and CaM | 第40页 |
Protein expression and purification of human nNOSs and CaM | 第40-44页 |
Spectrophotometric methods | 第44-47页 |
Stopped-flow spectroscopy | 第47-49页 |
Results | 第49-73页 |
Construction of the expression system of human nNOS full-length enzyme | 第49-50页 |
Expression and purification of human nNOS full-length enzyme | 第50-52页 |
Purification of CaM and buman nNOS-s | 第52页 |
Spectral characteristics of purified E.coli-Expressed enzyme | 第52-59页 |
Reductase activities of E.coli-expressed human nNOS | 第59-63页 |
Human neuronal nitric oxide synthase and its flavin domains catalyze one-electron reduction of Adriamycin, Mitomycin c, Menadione | 第63-66页 |
The superoxide formation by Adriamycin radical | 第66-68页 |
The flavin intermediates observed during the oxidation of the reduced enzymes by Adriamycin | 第68-73页 |
Discussion | 第73-79页 |
Reference | 第79-87页 |
List of publication | 第87-88页 |
Acknowledgments | 第88-89页 |
Appendix | 第89-93页 |
cDNA sequence of human nitric oxide synthase | 第89-92页 |
Amino acid sequence of nitric oxide synthase | 第92-93页 |
Plasmid map of pBluscript SKⅠ(-)/human nNOS | 第93页 |
Plasmid map of pCWori+ | 第93页 |