中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-48页 |
第一节 植物对昆虫抗性研究进展 | 第13-25页 |
1.植物抗性的遗传基础——基因对基因(gene-for-gene)假说 | 第13-16页 |
2.已经克隆的植物抗性基因的结构特点 | 第16-19页 |
3.植物抗虫的机制 | 第19-25页 |
·趋避性、抗生性和耐受性 | 第19-20页 |
·植物对昆虫的直接防御和间接防御 | 第20-22页 |
·直接防御作用 | 第20-22页 |
·间接防御作用 | 第22页 |
·植物防御反应中的信号传递 | 第22-25页 |
·植食性昆虫的引发子 | 第23-24页 |
·伤信号 | 第24页 |
·伤害反应与昆虫取食引发的反应重叠但并不完全一致 | 第24-25页 |
第二节 植物未知产物基因克隆的方法 | 第25-34页 |
1.基于基因表达水平的差异筛选分析 | 第25-27页 |
·差异显示PCR | 第25-26页 |
·抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH) | 第26-27页 |
2.基于DNA水平的基因克隆 | 第27-34页 |
·图位克隆法(map-basedcloning) | 第27-32页 |
·分子标记遗传连锁图 | 第28-30页 |
·目的基因的精细定位 | 第30页 |
·构建包含目的区段的重叠群(Contig) | 第30-31页 |
·确定候选基因 | 第31页 |
·功能互补试验 | 第31-32页 |
·转座子标签(Transposontagging) | 第32-33页 |
·基因同源序列法 | 第33-34页 |
第三节 水稻基因组研究 | 第34-40页 |
1.水稻基因组测序 | 第35-37页 |
·籼稻和粳稻的基因组草图 | 第35-36页 |
·国际水稻基因组测序计划 | 第36页 |
·水稻转录图谱的研究 | 第36-37页 |
2.水稻功能基因组研究 | 第37-40页 |
·生物信息学 | 第37-38页 |
·基因表达分析 | 第38页 |
·基因功能研究 | 第38-40页 |
·插入突变 | 第38-39页 |
·RNA干涉 | 第39-40页 |
第四节 水稻抗褐飞虱研究 | 第40-47页 |
1.褐飞虱的形态特征及其生活史 | 第40-41页 |
2.褐飞虱的取食行为及其对水稻的为害 | 第41-43页 |
3.褐飞虱的生物型 | 第43页 |
4.水稻抗褐飞虱资源的挖掘和利用 | 第43-44页 |
5.水稻抗褐飞虱基因的研究 | 第44-47页 |
第五节 研究的目的和意义 | 第47-48页 |
第二章 宽叶野生稻来源的抗褐飞虱基因Bphl2(t)的遗传分析及分子标记定位 | 第48-61页 |
引言 | 第48-49页 |
第一节 材料与方法 | 第49-53页 |
1.材料 | 第49页 |
·亲本材料 | 第49页 |
·遗传分析群体 | 第49页 |
·褐飞虱虫源 | 第49页 |
·分子标记种类及来源 | 第49页 |
2.实验方法 | 第49-53页 |
·分蘖法鉴定TNl/B14的F_2单株对褐飞虱的抗性 | 第49-50页 |
·标准苗期集团发法鉴定TNl/B14的重组自交系对褐飞虱的抗性 | 第50-51页 |
·蜜露量法鉴定TNl/B14的重组自交系对褐飞虱的抗性 | 第51页 |
·材料DNA提取 | 第51-52页 |
·集团分离分析法(BSA)寻找与抗褐飞虱基因连锁的分子标记 | 第52页 |
·SSR标记分析 | 第52页 |
·RFLP标记分析 | 第52-53页 |
·构建分子标记遗传连锁图 | 第53页 |
第二节 结果与分析 | 第53-58页 |
1.F_2单株的抗虫鉴定结果 | 第53-54页 |
2.TNl/B14的重组自交系群体的蜜露量法鉴定结果 | 第54页 |
3.TNl/B14的重组自交系群体的苗期集团法鉴定结果 | 第54-55页 |
4.SSR标记在TNl和B14基因组之间的多态性筛选 | 第55-56页 |
5.筛选与抗褐飞虱基因紧密连锁的SSR标记 | 第56-57页 |
6.水稻第四号染色体RFLP标记与抗性基因的连锁分析 | 第57页 |
7.利用TNl/B14重组自交系群体定位B14的抗褐飞虱基因 | 第57-58页 |
第三节 讨论 | 第58-61页 |
1.抗褐飞虱表型鉴定 | 第58-59页 |
2.SSR标记的应用价值 | 第59页 |
3.定位B14中抗褐飞虱基因的意义 | 第59-61页 |
第三章 药用野生稻来源的抗褐飞虱基因Bph15的精细定位 | 第61-85页 |
引言 | 第61-62页 |
第一节 材料和方法 | 第62-68页 |
1.材料 | 第62页 |
·实验水稻材料及褐飞虱虫源 | 第62页 |
·分子标记种类及来源 | 第62页 |
·BAC文库 | 第62页 |
2.方法 | 第62-68页 |
·Bphl5精细定位群体的构建 | 第62-63页 |
·R193/TNlF_2群体重组单株的筛选 | 第63页 |
·褐飞虱抗性鉴定 | 第63页 |
·DNA的提取 | 第63页 |
·RFLP分析 | 第63-64页 |
·AFLP分析 | 第64-65页 |
·SSR分析 | 第65页 |
·STS分析 | 第65-66页 |
·BAC克隆的筛选 | 第66-67页 |
·BAC末端的分离克隆 | 第67-68页 |
第二节 结果与分析 | 第68-83页 |
1.用于构建选系回交群体的两个MH63/B5重组自交系家系的特点 | 第68页 |
2.两个侧翼SSR标记RM261和MSl的混和扩增 | 第68-69页 |
3.利用SSR标记RM261和MSl筛选重组单株 | 第69-70页 |
4.选系回交群体中重组单株的褐飞虱抗性鉴定 | 第70-72页 |
5.Bphl5目标区段分子标记的加密 | 第72-76页 |
·与Bphl5紧密连锁的AFLP标记 | 第72-75页 |
·利用水稻基因组公共序列开发Bphl5区段的分子标记 | 第75-76页 |
6.Bphl5区段精细遗传连锁图谱的构建 | 第76-80页 |
7.Bphl5区段物理图谱的构建 | 第80-83页 |
第三节 讨论 | 第83-85页 |
第四章 RGl-RG2区段内候选基因分析 | 第85-103页 |
引言 | 第85页 |
第一节 材料和方法 | 第85-92页 |
1.材料 | 第85-86页 |
2.方法 | 第86-92页 |
·基因预测与注解 | 第86页 |
·RNA的抽提 | 第86页 |
·RT-PCR | 第86页 |
·mRNA原位杂交 | 第86-89页 |
·RNA探针的制备 | 第86-87页 |
·石蜡切片RNA原位杂交 | 第87-89页 |
·基因组序列的比对 | 第89-90页 |
·转化载体的构建 | 第90页 |
·农杆菌介导的粳稻品种H1493的遗传转化 | 第90-91页 |
·转基因植株的检测 | 第91-92页 |
第二节 结果与分析 | 第92-102页 |
1.RGl-RG2区段的基因预测分析 | 第92-93页 |
2.RGl-RG2区段预测基因的表达分析 | 第93-94页 |
3.ORF5、ORF9的的可能性分析 | 第94-99页 |
4.ORF5、ORF9的mRNA原位杂交分析 | 第99页 |
5.转基因载体的构建及鉴定 | 第99-101页 |
6.TO代转化植株的PCR检测 | 第101-102页 |
第三节 讨论 | 第102-103页 |
第五章 总讨论 | 第103-106页 |
1 水稻抗褐飞虱遗传研究的意义 | 第103页 |
2.基因组测序后的基因精细定位 | 第103-105页 |
3.关于抗褐飞虱候选基因 | 第105-106页 |
参考文献 | 第106-117页 |
附录Ⅰ 实验室常用Ptotocol及所用溶液配方 | 第117-122页 |
Protocol1:CTAB法大量制备水稻总DNA(用于Southern分析) | 第117页 |
Protocol2:CTAB法小量抽取水稻DNA(用于PCR分析) | 第117-118页 |
Protocol3;DNA的限制性消化,电泳与Southern转移 | 第118页 |
Protocol4:探针标记 | 第118-119页 |
Protocol5:Southern杂交 | 第119页 |
Protocol6:洗膜,压片及膜的再生 | 第119-120页 |
Protocol7:PAGE胶操作流程及试剂 | 第120-121页 |
Protocol8:RHA抽提和纯化 | 第121-122页 |
附录Ⅱ 在读期间已发表论文 | 第122-123页 |
致谢 | 第123页 |