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两个野生稻来源的抗褐飞虱基因的遗传分析和分子标记定位

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一章 文献综述第13-48页
 第一节 植物对昆虫抗性研究进展第13-25页
  1.植物抗性的遗传基础——基因对基因(gene-for-gene)假说第13-16页
  2.已经克隆的植物抗性基因的结构特点第16-19页
  3.植物抗虫的机制第19-25页
   ·趋避性、抗生性和耐受性第19-20页
   ·植物对昆虫的直接防御和间接防御第20-22页
     ·直接防御作用第20-22页
     ·间接防御作用第22页
   ·植物防御反应中的信号传递第22-25页
     ·植食性昆虫的引发子第23-24页
     ·伤信号第24页
     ·伤害反应与昆虫取食引发的反应重叠但并不完全一致第24-25页
 第二节 植物未知产物基因克隆的方法第25-34页
  1.基于基因表达水平的差异筛选分析第25-27页
   ·差异显示PCR第25-26页
   ·抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)第26-27页
  2.基于DNA水平的基因克隆第27-34页
   ·图位克隆法(map-basedcloning)第27-32页
     ·分子标记遗传连锁图第28-30页
     ·目的基因的精细定位第30页
     ·构建包含目的区段的重叠群(Contig)第30-31页
     ·确定候选基因第31页
     ·功能互补试验第31-32页
   ·转座子标签(Transposontagging)第32-33页
   ·基因同源序列法第33-34页
 第三节 水稻基因组研究第34-40页
  1.水稻基因组测序第35-37页
   ·籼稻和粳稻的基因组草图第35-36页
   ·国际水稻基因组测序计划第36页
   ·水稻转录图谱的研究第36-37页
  2.水稻功能基因组研究第37-40页
   ·生物信息学第37-38页
   ·基因表达分析第38页
   ·基因功能研究第38-40页
     ·插入突变第38-39页
     ·RNA干涉第39-40页
 第四节 水稻抗褐飞虱研究第40-47页
  1.褐飞虱的形态特征及其生活史第40-41页
  2.褐飞虱的取食行为及其对水稻的为害第41-43页
  3.褐飞虱的生物型第43页
  4.水稻抗褐飞虱资源的挖掘和利用第43-44页
  5.水稻抗褐飞虱基因的研究第44-47页
 第五节 研究的目的和意义第47-48页
第二章 宽叶野生稻来源的抗褐飞虱基因Bphl2(t)的遗传分析及分子标记定位第48-61页
 引言第48-49页
 第一节 材料与方法第49-53页
  1.材料第49页
   ·亲本材料第49页
   ·遗传分析群体第49页
   ·褐飞虱虫源第49页
   ·分子标记种类及来源第49页
  2.实验方法第49-53页
   ·分蘖法鉴定TNl/B14的F_2单株对褐飞虱的抗性第49-50页
   ·标准苗期集团发法鉴定TNl/B14的重组自交系对褐飞虱的抗性第50-51页
   ·蜜露量法鉴定TNl/B14的重组自交系对褐飞虱的抗性第51页
   ·材料DNA提取第51-52页
   ·集团分离分析法(BSA)寻找与抗褐飞虱基因连锁的分子标记第52页
   ·SSR标记分析第52页
   ·RFLP标记分析第52-53页
   ·构建分子标记遗传连锁图第53页
 第二节 结果与分析第53-58页
  1.F_2单株的抗虫鉴定结果第53-54页
  2.TNl/B14的重组自交系群体的蜜露量法鉴定结果第54页
  3.TNl/B14的重组自交系群体的苗期集团法鉴定结果第54-55页
  4.SSR标记在TNl和B14基因组之间的多态性筛选第55-56页
  5.筛选与抗褐飞虱基因紧密连锁的SSR标记第56-57页
  6.水稻第四号染色体RFLP标记与抗性基因的连锁分析第57页
  7.利用TNl/B14重组自交系群体定位B14的抗褐飞虱基因第57-58页
 第三节 讨论第58-61页
  1.抗褐飞虱表型鉴定第58-59页
  2.SSR标记的应用价值第59页
  3.定位B14中抗褐飞虱基因的意义第59-61页
第三章 药用野生稻来源的抗褐飞虱基因Bph15的精细定位第61-85页
 引言第61-62页
 第一节 材料和方法第62-68页
  1.材料第62页
   ·实验水稻材料及褐飞虱虫源第62页
   ·分子标记种类及来源第62页
   ·BAC文库第62页
  2.方法第62-68页
   ·Bphl5精细定位群体的构建第62-63页
   ·R193/TNlF_2群体重组单株的筛选第63页
   ·褐飞虱抗性鉴定第63页
   ·DNA的提取第63页
   ·RFLP分析第63-64页
   ·AFLP分析第64-65页
   ·SSR分析第65页
   ·STS分析第65-66页
   ·BAC克隆的筛选第66-67页
   ·BAC末端的分离克隆第67-68页
 第二节 结果与分析第68-83页
  1.用于构建选系回交群体的两个MH63/B5重组自交系家系的特点第68页
  2.两个侧翼SSR标记RM261和MSl的混和扩增第68-69页
  3.利用SSR标记RM261和MSl筛选重组单株第69-70页
  4.选系回交群体中重组单株的褐飞虱抗性鉴定第70-72页
  5.Bphl5目标区段分子标记的加密第72-76页
   ·与Bphl5紧密连锁的AFLP标记第72-75页
   ·利用水稻基因组公共序列开发Bphl5区段的分子标记第75-76页
  6.Bphl5区段精细遗传连锁图谱的构建第76-80页
  7.Bphl5区段物理图谱的构建第80-83页
 第三节 讨论第83-85页
第四章 RGl-RG2区段内候选基因分析第85-103页
 引言第85页
 第一节 材料和方法第85-92页
  1.材料第85-86页
  2.方法第86-92页
   ·基因预测与注解第86页
   ·RNA的抽提第86页
   ·RT-PCR第86页
   ·mRNA原位杂交第86-89页
     ·RNA探针的制备第86-87页
     ·石蜡切片RNA原位杂交第87-89页
   ·基因组序列的比对第89-90页
   ·转化载体的构建第90页
   ·农杆菌介导的粳稻品种H1493的遗传转化第90-91页
   ·转基因植株的检测第91-92页
 第二节 结果与分析第92-102页
  1.RGl-RG2区段的基因预测分析第92-93页
  2.RGl-RG2区段预测基因的表达分析第93-94页
  3.ORF5、ORF9的的可能性分析第94-99页
  4.ORF5、ORF9的mRNA原位杂交分析第99页
  5.转基因载体的构建及鉴定第99-101页
  6.TO代转化植株的PCR检测第101-102页
 第三节 讨论第102-103页
第五章 总讨论第103-106页
 1 水稻抗褐飞虱遗传研究的意义第103页
 2.基因组测序后的基因精细定位第103-105页
 3.关于抗褐飞虱候选基因第105-106页
参考文献第106-117页
附录Ⅰ 实验室常用Ptotocol及所用溶液配方第117-122页
 Protocol1:CTAB法大量制备水稻总DNA(用于Southern分析)第117页
 Protocol2:CTAB法小量抽取水稻DNA(用于PCR分析)第117-118页
 Protocol3;DNA的限制性消化,电泳与Southern转移第118页
 Protocol4:探针标记第118-119页
 Protocol5:Southern杂交第119页
 Protocol6:洗膜,压片及膜的再生第119-120页
 Protocol7:PAGE胶操作流程及试剂第120-121页
 Protocol8:RHA抽提和纯化第121-122页
附录Ⅱ 在读期间已发表论文第122-123页
致谢第123页

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